En genética y biología del desarrollo , la transferencia nuclear de células somáticas ( SCNT , por sus siglas en inglés) es una estrategia de laboratorio para crear un embrión viable a partir de una célula del cuerpo y un óvulo . La técnica consiste en tomar un ovocito (óvulo) desnuclearizado e implantar un núcleo donante de una célula somática (del cuerpo). Se utiliza tanto en la clonación terapéutica como en la reproductiva . En 1996, la oveja Dolly se hizo famosa por ser el primer caso exitoso de clonación reproductiva de un mamífero. [1] En enero de 2018, un equipo de científicos en Shanghái anunció la clonación exitosa de dos macacos cangrejeros hembras (llamados Zhong Zhong y Hua Hua ) a partir de núcleos fetales. [2]
La " clonación terapéutica " se refiere al uso potencial de SCNT en medicina regenerativa ; este enfoque ha sido defendido como una respuesta a los muchos problemas relacionados con las células madre embrionarias (ESC) y la destrucción de embriones viables para uso médico, aunque aún quedan dudas sobre cuán homólogos son realmente los dos tipos de células.
La transferencia nuclear de células somáticas es una técnica de clonación en la que el núcleo de una célula somática se transfiere al citoplasma de un óvulo enucleado. Después de la transferencia de células somáticas, los factores citoplasmáticos afectan al núcleo para convertirse en un cigoto. El óvulo desarrolla la etapa de blastocisto para ayudar a crear células madre embrionarias a partir de la masa celular interna del blastocisto. [3] El primer mamífero desarrollado mediante esta técnica fue la oveja Dolly, en 1996. [4]
Aunque Dolly es generalmente reconocida como el primer animal en ser clonado utilizando esta técnica, existen ejemplos anteriores de SCNT que datan de la década de 1950. En particular, la investigación de Sir John Gurdon en 1958 implicó la clonación de Xenopus laevis utilizando los principios de SCNT. [5] En resumen, el experimento consistió en inducir a un espécimen hembra a ovular, momento en el cual se extrajeron sus óvulos. A partir de aquí, el óvulo fue enucleado utilizando irradiación ultravioleta para inhabilitar el pronúcleo del óvulo. En este punto, el óvulo preparado y el núcleo de la célula donante se combinaron, y luego se procedió a la incubación y al desarrollo final en un renacuajo. [5] La aplicación de SCNT de Gurdon difiere de las aplicaciones más modernas e incluso de las aplicaciones utilizadas en otros sistemas modelo de la época (es decir, Rana pipiens ) debido a su uso de irradiación UV para enuclear el óvulo en lugar de usar una pipeta para extraer el núcleo del óvulo. [6]
El proceso de transferencia nuclear de células somáticas involucra dos células diferentes. La primera es un gameto femenino, conocido como óvulo (huevo/ocito). En los experimentos de transferencia nuclear de células somáticas humanas, estos óvulos se obtienen a través de donantes que consienten, utilizando estimulación ovárica. La segunda es una célula somática, refiriéndose a las células del cuerpo humano. Las células de la piel, las células grasas y las células del hígado son solo algunos ejemplos. El material genético del óvulo donante se elimina y se descarta, dejándolo "desprogramado". Lo que queda es una célula somática y un óvulo enucleado. Luego, estos se fusionan insertando la célula somática en el óvulo "vacío". [7] Después de ser insertado en el óvulo, el núcleo de la célula somática es reprogramado por su óvulo anfitrión. El óvulo, que ahora contiene el núcleo de la célula somática, es estimulado con un choque y comenzará a dividirse. El óvulo ahora es viable y capaz de producir un organismo adulto que contiene toda la información genética necesaria de un solo progenitor. El desarrollo se producirá de forma normal y, tras muchas divisiones mitóticas, la célula individual formará un blastocisto (un embrión en fase temprana con unas 100 células) con un genoma idéntico al del organismo original (es decir, un clon). [8] Las células madre pueden obtenerse entonces mediante la destrucción de este embrión clonado para su uso en la clonación terapéutica o, en el caso de la clonación reproductiva, el embrión clonado se implanta en una madre huésped para su posterior desarrollo y se lleva a término.
La transferencia de secreciones celulares convencionales requiere el uso de micromanipuladores , que son máquinas costosas que se utilizan para manipular células con precisión. [9] Con el micromanipulador, un científico hace una abertura en la zona pelúcida y succiona el núcleo original del óvulo con una pipeta. Luego, hace otra abertura con una pipeta diferente para inyectar el núcleo del donante. [10] Alternativamente, se puede aplicar energía eléctrica para fusionar el óvulo vacío con una célula donante que contenga un núcleo. [9]
En 2001, científicos indios describieron una técnica alternativa denominada "clonación artesanal". Esta técnica no requiere el uso de un micromanipulador y se ha utilizado para la clonación de varias especies de ganado. [11] La extracción del núcleo se puede realizar químicamente, mediante una centrifugadora o con el uso de una cuchilla. El óvulo vacío se pega a la célula donante con fitohemaglutinina y luego se fusiona utilizando electricidad. (Si se utiliza una cuchilla, se requerirían dos pasos de fusión: la primera fusión es entre el donante y un medio óvulo vacío, la segunda entre el "semi-embrión" de tamaño medio y otro medio óvulo vacío.) [9]
El trasplante nuclear de células somáticas se ha convertido en un foco de estudio en la investigación con células madre . El objetivo de llevar a cabo este procedimiento es obtener células pluripotentes a partir de un embrión clonado. Estas células son compatibles genéticamente con el organismo donante del que proceden. Esto les da la capacidad de crear células pluripotentes específicas del paciente, que luego podrían utilizarse en terapias o en la investigación de enfermedades. [12]
Las células madre embrionarias son células indiferenciadas de un embrión. Se considera que estas células tienen un potencial pluripotente porque tienen la capacidad de dar lugar a todos los tejidos que se encuentran en un organismo adulto. Esta capacidad permite a las células madre crear cualquier tipo de célula, que luego podría trasplantarse para reemplazar células dañadas o destruidas. La investigación con células madre embrionarias humanas genera controversia debido a la destrucción de embriones humanos viables, lo que lleva a los científicos a buscar métodos alternativos para obtener células madre pluripotentes, como la transferencia de células dendríticas.
Un posible uso de las células madre genéticamente compatibles con un paciente sería la creación de líneas celulares que tengan genes vinculados a la enfermedad particular de un paciente. Al hacerlo, se podría crear un modelo in vitro , que sería útil para estudiar esa enfermedad en particular, potencialmente descubrir su fisiopatología y descubrir terapias. [13] Por ejemplo, si una persona con enfermedad de Parkinson donara sus células somáticas, las células madre resultantes de la SCNT tendrían genes que contribuyen a la enfermedad de Parkinson. Las líneas de células madre específicas de la enfermedad podrían entonces estudiarse para comprender mejor la afección. [14]
Otra aplicación de la investigación con células madre SCNT es el uso de líneas de células madre específicas del paciente para generar tejidos o incluso órganos para trasplantar al paciente específico. [15] Las células resultantes serían genéticamente idénticas a las células somáticas del donante, evitando así cualquier complicación por rechazo del sistema inmunológico . [14] [16]
En la actualidad, sólo un puñado de laboratorios en el mundo utilizan técnicas de transferencia de núcleos de células somáticas en la investigación con células madre humanas. En los Estados Unidos , científicos del Instituto de Células Madre de Harvard, la Universidad de California en San Francisco , la Universidad de Salud y Ciencia de Oregón , [17] Stemagen (La Jolla, CA) y posiblemente Advanced Cell Technology están investigando actualmente una técnica para utilizar la transferencia nuclear de células somáticas para producir células madre embrionarias . [18] En el Reino Unido , la Autoridad de Fertilización Humana y Embriología ha otorgado permiso a grupos de investigación del Instituto Roslin y el Centro para la Vida de Newcastle . [19] La transferencia de núcleos de células somáticas también podría estar ocurriendo en China. [20]
Aunque se han obtenido numerosos resultados positivos con la clonación de animales, aún quedan interrogantes sobre los mecanismos de reprogramación en el óvulo. A pesar de los numerosos intentos, el éxito en la creación de células madre embrionarias humanas mediante transferencia nuclear ha sido limitado. Existe un problema en la capacidad de las células humanas para formar un blastocisto; las células no logran pasar de la etapa de desarrollo de ocho células. Se cree que esto se debe a que el núcleo de la célula somática no puede activar genes embrionarios cruciales para el desarrollo adecuado. En estos experimentos anteriores se utilizaron procedimientos desarrollados en animales no primates con poco éxito.
Un grupo de investigación de la Universidad de Ciencias y Salud de Oregón demostró que los procedimientos de SCNT desarrollados para primates funcionaron con éxito utilizando células de la piel. La clave de su éxito fue utilizar ovocitos en metafase II (MII) del ciclo celular. Los óvulos en metafase II contienen factores especiales en el citoplasma que tienen una capacidad especial para reprogramar los núcleos de células somáticas implantadas en células con estados pluripotentes. Cuando se extrae el núcleo del óvulo, la célula pierde su información genética. Se ha achacado a esto la razón por la que los óvulos enucleados ven obstaculizada su capacidad de reprogramación. Se cree que los genes embrionarios críticos están físicamente vinculados a los cromosomas del óvulo y que la enucleación afecta negativamente a estos factores. Otra posibilidad es que la extracción del núcleo del óvulo o la inserción del núcleo somático provoquen daños en el citoplasto, lo que afecta a la capacidad de reprogramación.
Teniendo esto en cuenta, el grupo de investigación aplicó su nueva técnica en un intento de producir células madre humanas SCNT. En mayo de 2013, el grupo de Oregon informó la derivación exitosa de líneas de células madre embrionarias humanas derivadas a través de SCNT, utilizando células de donantes fetales e infantiles. Utilizando ovocitos MII de voluntarios y su procedimiento SCNT mejorado, se produjeron con éxito embriones de clones humanos. Estos embriones eran de mala calidad, carecían de una masa celular interna sustancial y un trofectodermo mal construido . Los embriones imperfectos impidieron la adquisición de ESC humanas. La adición de cafeína durante la extracción del núcleo del óvulo y la fusión de la célula somática y el óvulo mejoró la formación del blastocisto y el aislamiento de ESC. Se descubrió que las ESC obtenidas eran capaces de producir teratomas, expresaban factores de transcripción pluripotentes y expresaban un cariotipo 46XX normal, lo que indica que estos SCNT eran de hecho similares a las ESC. [17] Este fue el primer caso de uso exitoso de SCNT para reprogramar células somáticas humanas. Este estudio utilizó células somáticas fetales e infantiles para producir sus ESC.
En abril de 2014, un equipo internacional de investigación amplió este avance. Quedaba la cuestión de si se podría lograr el mismo éxito utilizando células somáticas adultas. Se pensaba que los cambios epigenéticos y relacionados con la edad posiblemente obstaculizaban la capacidad de las células somáticas adultas para ser reprogramadas. Al implementar el procedimiento iniciado por el grupo de investigación de Oregon, de hecho pudieron cultivar células madre generadas por SCNT utilizando células adultas de dos donantes de 35 y 75 años, lo que indica que la edad no impide la capacidad de una célula para ser reprogramada. [21] [22]
A finales de abril de 2014, la New York Stem Cell Foundation logró crear células madre SCNT derivadas de células somáticas adultas. Una de estas líneas de células madre se derivó de las células de un donante de un diabético tipo 1. El grupo pudo cultivar con éxito estas células madre e inducir la diferenciación. Cuando se inyectaron en ratones, se formaron con éxito células de las tres capas germinales. Las más significativas de estas células fueron las que expresaban insulina y eran capaces de secretar la hormona. [23] Estas células productoras de insulina podrían usarse para la terapia de reemplazo en diabéticos, lo que demuestra un potencial terapéutico real de las células madre SCNT.
El impulso de la investigación con células madre basada en SCNT se ha visto disminuido por el desarrollo y la mejora de métodos alternativos de generación de células madre. En 2007 se desarrollaron métodos para reprogramar células corporales normales en células madre pluripotentes en humanos. El año siguiente, este método logró un objetivo clave de la investigación con células madre basada en SCNT: la derivación de líneas de células madre pluripotentes que tienen todos los genes vinculados a varias enfermedades. [24] Algunos científicos que trabajan en la investigación con células madre basada en SCNT han pasado recientemente a los nuevos métodos de células madre pluripotentes inducidas. Aunque estudios recientes han puesto en duda la similitud de las células iPS con las células madre embrionarias. La memoria epigenética en las iPS afecta al linaje celular en el que se pueden diferenciar. Por ejemplo, una célula iPS derivada de una célula sanguínea que utiliza solo los factores yamanaka será más eficiente en la diferenciación en células sanguíneas, mientras que será menos eficiente en la creación de una neurona. [25] Sin embargo, estudios recientes indican que los cambios en la memoria epigenética de las iPSC utilizando moléculas pequeñas pueden restablecerlas a un estado casi ingenuo de pluripotencia. [26] [27] Los estudios han demostrado incluso que, mediante complementación tetraploide, se puede crear un organismo viable completo únicamente a partir de iPSC. [28] Se ha descubierto que las células madre SCNT tienen desafíos similares. La causa de los bajos rendimientos en la clonación de SCNT bovina se ha atribuido, en los últimos años, a la memoria epigenética previamente oculta de las células somáticas que se estaban introduciendo en el ovocito. [29]
Esta técnica es actualmente la base para la clonación de animales (como la famosa oveja Dolly ), [30] y se ha propuesto como una posible forma de clonar humanos. El uso de SCNT en la clonación reproductiva ha demostrado ser difícil y con un éxito limitado. La alta mortalidad fetal y neonatal hace que el proceso sea muy ineficiente. La descendencia clonada resultante también está plagada de trastornos del desarrollo y de la impronta en especies no humanas. Por estas razones, junto con objeciones morales y éticas, la clonación reproductiva en humanos está proscrita en más de 30 países. [31] La mayoría de los investigadores creen que en el futuro previsible no será posible utilizar la técnica de clonación actual para producir un clon humano que se desarrolle hasta el término. Sigue siendo una posibilidad, aunque se requerirán ajustes críticos para superar las limitaciones actuales durante el desarrollo embrionario temprano en SCNT humano. [32] [33]
También existe la posibilidad de tratar enfermedades asociadas con mutaciones en el ADN mitocondrial. Estudios recientes muestran que la transferencia de núcleo de una célula del cuerpo afectada por una de estas enfermedades a un ovocito sano previene la herencia de la enfermedad mitocondrial. Este tratamiento no implica clonación, pero produciría un niño con tres padres genéticos: un padre que proporciona un espermatozoide, una madre que proporciona el núcleo del óvulo y otra madre que proporciona el óvulo enucleado. [15]
En 2018, se informó de la primera clonación exitosa de primates mediante transferencia nuclear de células somáticas, el mismo método que la oveja Dolly , con el nacimiento de dos clones femeninos vivos ( macacos cangrejeros llamados Zhong Zhong y Hua Hua ). [2] [34] [35] [36] [37]
La transferencia nuclear entre especies (iSCNT, por sus siglas en inglés) es un método de transferencia nuclear de células somáticas que se utiliza para facilitar el rescate de especies en peligro de extinción, o incluso para restaurar especies después de su extinción. La técnica es similar a la clonación SCNT , que normalmente se realiza entre animales domésticos y roedores, o cuando hay un suministro disponible de ovocitos y animales sustitutos. Sin embargo, la clonación de especies muy amenazadas o extintas requiere el uso de un método alternativo de clonación. La transferencia nuclear entre especies utiliza un huésped y un donante de dos organismos diferentes que son especies estrechamente relacionadas y dentro del mismo género. En 2000, Robert Lanza pudo producir un feto clonado de un gaur , Bos gaurus , combinándolo con éxito con una vaca doméstica, Bos taurus . [38]
En 2017, nació el primer camello bactriano clonado mediante iSCNT, utilizando ovocitos de camello dromedario y células de fibroblastos de piel de un camello bactriano adulto como núcleos donantes. [39]
La transferencia nuclear de células somáticas (SCNT, por sus siglas en inglés) puede ser ineficiente debido a las tensiones que se ejercen tanto sobre el óvulo como sobre el núcleo introducido. Esto puede dar como resultado un bajo porcentaje de células reprogramadas con éxito. Por ejemplo, en 1996, nació la oveja Dolly después de que se usaran 277 óvulos para SCNT, lo que creó 29 embriones viables, lo que le dio una miserable eficiencia del 0,3%. [40] Solo tres de estos embriones sobrevivieron hasta el nacimiento, y solo uno sobrevivió hasta la edad adulta. [30] Millie, la descendencia que sobrevivió, necesitó 95 intentos para producirse. [40] Debido a que el procedimiento no estaba automatizado y tenía que realizarse manualmente bajo un microscopio , SCNT requería muchos recursos. Otra razón por la que hay una tasa de mortalidad tan alta con la descendencia clonada se debe a que el feto es más grande que incluso otras crías grandes, lo que resulta en la muerte poco después del nacimiento. [40] La bioquímica involucrada en la reprogramación del núcleo de la célula somática diferenciada y la activación del óvulo receptor también estaba lejos de entenderse. Otra limitación es intentar utilizar embriones unicelulares durante la transfusión de células madre. Cuando se utilizan solo embriones clonados unicelulares, el experimento tiene un 65 % de posibilidades de fallar en el proceso de creación de la mórula o el blastocisto. La bioquímica también tiene que ser extremadamente precisa, ya que la mayoría de las muertes de fetos clonados en etapa avanzada son el resultado de una placentación inadecuada. [40] Sin embargo, en 2014, los investigadores informaban tasas de éxito del 70-80 % con cerdos clonados [41] y en 2016 se informó que una empresa coreana, Sooam Biotech, producía 500 embriones clonados al día. [42]
En la SCNT, no se transfiere toda la información genética de la célula donante, ya que las mitocondrias de la célula donante que contienen su propio ADN mitocondrial se dejan atrás. Las células híbridas resultantes conservan las estructuras mitocondriales que originalmente pertenecían al óvulo. Como consecuencia, los clones como Dolly que nacen de SCNT no son copias perfectas del núcleo del donante. Este hecho también puede obstaculizar los posibles beneficios de los tejidos y órganos derivados de SCNT para la terapia, ya que puede haber una respuesta inmunológica al ADNmt ajeno después del trasplante. Además, los genes que se encuentran en el genoma de la mitocondria necesitan comunicarse con el genoma de la célula y un fallo de la reprogramación nuclear de la célula somática puede provocar la falta de comunicación con el genoma de la célula, lo que provocaría el fracaso de la SCNT. [43]
Los factores epigenéticos desempeñan un papel importante en el éxito o el fracaso de los intentos de SCNT. La expresión génica variable de una célula previamente activada y sus ARNm puede conducir a la sobreexpresión, subexpresión o, en algunos casos, a genes no funcionales que afectarán al feto en desarrollo. [44] Un ejemplo de limitaciones epigenéticas de SCNT es la regulación de la metilación de histonas. La regulación diferente de estos genes de metilación de histonas puede afectar directamente la transcripción del genoma en desarrollo, causando el fracaso de SCNT. [45] Otro factor que contribuye al fracaso de SCNT incluye la inactivación del cromosoma X en el desarrollo temprano del embrión. Un gen no codificante llamado XIST es responsable de la inactivación de un cromosoma X durante el desarrollo, sin embargo, en SCNT este gen puede tener una regulación anormal causando la muerte del feto en desarrollo. [45]
Las técnicas de transferencia nuclear presentan un conjunto de consideraciones éticas diferentes a las asociadas con el uso de otras células madre, como las células madre embrionarias, que son controvertidas por su requisito de destruir un embrión. Estas consideraciones diferentes han llevado a algunas personas y organizaciones que no se oponen a la investigación con células madre embrionarias humanas a preocuparse por la investigación con células madre embrionarias humanas o a oponerse a ella. [46] [47] [48]
Una de las preocupaciones es que la creación de blástulas en la investigación con células madre humanas basada en la transferencia de esperma de células madre conduzca a la clonación reproductiva de seres humanos. Ambos procesos utilizan el mismo primer paso: la creación de un embrión nuclear transferido, muy probablemente mediante la transferencia de esperma de células madre. Quienes sostienen esta preocupación a menudo abogan por una regulación estricta de la transferencia de esperma de células madre para impedir la implantación de cualquier producto derivado con la intención de la reproducción humana [49] , o por su prohibición [46] .
Una segunda preocupación importante es la fuente adecuada de los óvulos que se necesitan. La SCNT requiere óvulos humanos , que sólo pueden obtenerse de mujeres. La fuente más común de estos óvulos hoy en día son los óvulos que se producen en exceso de la necesidad clínica durante el tratamiento de FIV. Se trata de un procedimiento mínimamente invasivo, pero conlleva algunos riesgos para la salud, como el síndrome de hiperestimulación ovárica .
Una de las ideas para el éxito de las terapias con células madre es la creación de líneas de células madre personalizadas para cada paciente. Cada línea de células madre personalizada estaría formada por un conjunto de células madre idénticas, cada una de ellas con el ADN del propio paciente, reduciendo o eliminando así cualquier problema de rechazo cuando se trasplantaran las células madre para el tratamiento. Por ejemplo, para tratar a un hombre con enfermedad de Parkinson, se trasplantaría un núcleo celular de una de sus células mediante SCNT a un óvulo de una donante de óvulos, creando un linaje único de células madre casi idéntico a las células del propio paciente. (Habría diferencias. Por ejemplo, el ADN mitocondrial sería el mismo que el del donante de óvulos. En comparación, sus propias células llevarían el ADN mitocondrial de su madre).
Potencialmente, millones de pacientes podrían beneficiarse de la terapia con células madre, y cada paciente necesitaría una gran cantidad de óvulos donados para crear con éxito una única línea de células madre terapéuticas personalizadas. Una cantidad tan grande de óvulos donados superaría la cantidad de óvulos que actualmente quedan y están disponibles de parejas que intentan tener hijos mediante tecnología de reproducción asistida . Por lo tanto, sería necesario inducir a mujeres jóvenes y sanas a vender óvulos para utilizarlos en la creación de líneas de células madre personalizadas que luego podrían ser compradas por la industria médica y vendidas a los pacientes. Hasta el momento no está claro de dónde provendrían todos estos óvulos.
Los expertos en células madre consideran improbable que se produzcan cantidades tan grandes de donaciones de óvulos humanos en un país desarrollado debido a los efectos desconocidos a largo plazo sobre la salud pública que tendría el tratamiento de un gran número de mujeres jóvenes sanas con dosis elevadas de hormonas para inducir la hiperovulación (la ovulación de varios óvulos a la vez). Aunque estos tratamientos se llevan realizando desde hace varias décadas, no se han estudiado sus efectos a largo plazo ni se ha declarado que su uso a gran escala en mujeres sanas sea seguro. Se sabe que los tratamientos a largo plazo con dosis mucho más bajas de hormonas aumentan la tasa de cáncer décadas después. Se desconoce si los tratamientos hormonales para inducir la hiperovulación podrían tener efectos similares. También existen cuestiones éticas en torno al pago de óvulos. En general, la comercialización de partes del cuerpo se considera poco ética y está prohibida en la mayoría de los países. [ ¿Por qué? ] Los óvulos humanos han sido una notable excepción a esta regla durante algún tiempo.
Para abordar el problema de la creación de un mercado de óvulos humanos, algunos investigadores de células madre están estudiando la posibilidad de crear óvulos artificiales. Si tienen éxito, no se necesitarían donaciones de óvulos humanos para crear líneas de células madre personalizadas. Sin embargo, esta tecnología puede estar muy lejos.
La transferencia de células humanas mediante SCNT actualmente es legal para fines de investigación en el Reino Unido , habiéndose incorporado a la Ley de Fertilización Humana y Embriología de 1990. [ 50] [7] Se debe obtener permiso de la Autoridad de Fertilización Humana y Embriología para realizar o intentar una SCNT.
En los Estados Unidos, la práctica sigue siendo legal, ya que no ha sido abordada por la ley federal. [51] Sin embargo, en 2002, una moratoria sobre la financiación federal de los Estados Unidos para la SCNT prohíbe financiar la práctica con fines de investigación. Por lo tanto, aunque legal, la SCNT no puede ser financiada por el gobierno federal. [52] Los académicos estadounidenses han argumentado recientemente que, dado que el producto de la SCNT es un embrión clonado, en lugar de un embrión humano, estas políticas son moralmente incorrectas y deberían revisarse. [53]
En 2003, las Naciones Unidas adoptaron una propuesta presentada por Costa Rica , instando a los Estados miembros a "prohibir todas las formas de clonación humana en la medida en que sean incompatibles con la dignidad humana y la protección de la vida humana". [54] Esta frase puede incluir la SCNT, dependiendo de la interpretación.
El Convenio del Consejo de Europa sobre derechos humanos y biomedicina y su Protocolo adicional al Convenio para la protección de los derechos humanos y la dignidad del ser humano con respecto a las aplicaciones de la biología y la medicina, sobre la prohibición de la clonación de seres humanos, parecen prohibir la transferencia de secreciones celulares de seres humanos. De los 45 Estados miembros del Consejo, el Convenio ha sido firmado por 31 y ratificado por 18. El Protocolo adicional ha sido firmado por 29 países miembros y ratificado por 14. [55]