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método de golgi

Una neurona piramidal neocortical humana teñida mediante la técnica de Golgi. Obsérvese la dendrita apical que se extiende verticalmente por encima del soma y las numerosas dendritas basales que se irradian lateralmente desde la base del cuerpo celular. Foto de Bob Jacobs, Colorado College.
Dibujo de Camillo Golgi de un hipocampo teñido con el método del nitrato de plata
Dibujo de una célula de Purkinje en la corteza del cerebelo realizado por Santiago Ramón y Cajal, que demuestra claramente el poder del método de tinción de Golgi para revelar detalles finos.

El método de Golgi es una técnica de tinción con plata que se utiliza para visualizar el tejido nervioso bajo microscopía óptica. El método fue descubierto por Camillo Golgi , un médico y científico italiano , quien publicó la primera imagen realizada con esta técnica en 1873. [1] Inicialmente Golgi la llamó reacción negra ( la reazione nera ), pero se hizo más conocida como la tinción de Golgi o posteriormente, el método de Golgi.

La tinción de Golgi fue utilizada por el neuroanatomista español Santiago Ramón y Cajal (1852-1934) para descubrir una serie de hechos novedosos sobre la organización del sistema nervioso, lo que inspiró el nacimiento de la doctrina neuronal . Finalmente, Ramón y Cajal mejoró la técnica utilizando un método que denominó "doble impregnación". La técnica de tinción de Ramón y Cajal, todavía en uso, se llama Tinción de Cajal. [ cita necesaria ]

Mecanismo

Las células del tejido nervioso están densamente empaquetadas y se puede obtener poca información sobre sus estructuras e interconexiones si se tiñen todas las células. Además, las delgadas extensiones filamentosas de las células neurales, incluidos el axón y las dendritas de las neuronas, son demasiado delgadas y transparentes para verse con técnicas de tinción normales. El método de Golgi tiñe un número limitado de células al azar en su totalidad. El mecanismo por el cual esto sucede aún se desconoce en gran medida. [2] Las dendritas, así como el soma celular, están claramente teñidas de marrón y negro y se pueden seguir en toda su longitud, lo que permitió a los neuroanatomistas rastrear las conexiones entre las neuronas y hacer visible la compleja estructura de redes de muchas partes del cerebro. y médula espinal .

La tinción de Golgi se logra impregnando tejido nervioso fijado con aldehído con dicromato de potasio y nitrato de plata . Las células así teñidas se rellenan mediante microcristalización de cromato de plata .

Técnica

Según SynapseWeb, [3] esta es la receta para la técnica de tinción de Golgi:

  1. Sumerja un bloque (aprox. 10x5 mm) de tejido cerebral fijado con formaldehído (o paraformaldehído - perfundido con glutaraldehído ) en una solución acuosa al 2% de dicromato de potasio durante 2 días
  2. Secar el bloque brevemente con papel de filtro .
  3. Sumerja el bloque en una solución acuosa de nitrato de plata al 2% durante otros 2 días.
  4. Cortar secciones de aprox. 20 a 100  µm de espesor.
  5. Deshidratar rápidamente en etanol , aclarar y montar (p. ej., en Depex o Enthalan).

Desde entonces, esta técnica se ha perfeccionado para sustituir el precipitado de plata con oro sumergiendo la muestra en cloruro de oro y luego en ácido oxálico , seguido de la eliminación de la plata con tiosulfato de sodio . Esto preserva un mayor grado de estructura fina con los detalles ultraestructurales marcados por pequeñas partículas de oro. [4]

Cita

Ramón y Cajal dijo del método de Golgi:

Expresé la sorpresa que experimenté al ver con mis propios ojos los maravillosos poderes reveladores de la reacción cromo-plata y la ausencia de cualquier excitación en el mundo científico suscitada por su descubrimiento.
Recuerdos de mi vida, vol. 2, Historia de mi trabajo científico . Madrid: Moya, 1917, p. 76.

Referencias

  1. ^ Dedo, Stanley (1994). Orígenes de la neurociencia: una historia de exploraciones sobre la función cerebral . Prensa de la Universidad de Oxford. pag. 45.ISBN​ 9780195146943. OCLC  27151391. En 1873, Golgi publicó la primera imagen breve pero "adecuada" de la reazione nera (la reacción negra), que mostraba la célula nerviosa completa, incluido su cuerpo celular, su axón y sus dendritas ramificadas.
  2. ^ Nicholls, JG (2001). De la neurona al cerebro . Asociados Sinauer. págs.5. ISBN 0878934391.
  3. ^ Spacek, J., Fiala, J. (28 de junio de 2002). "Visualización de espinas dendríticas". Sinapsis Web. Archivado desde el original el 26 de junio de 2010 . Consultado el 17 de junio de 2010 .{{cite web}}: Mantenimiento CS1: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  4. ^ "Inicio - Springer".[ enlace muerto ]

enlaces externos