En biología molecular y genética , un blot es un método de transferencia de biomoléculas grandes ( proteínas , ADN o ARN ) a un portador, como una membrana compuesta de nitrocelulosa , fluoruro de polivinilideno o nailon . En muchos casos, esto se hace después de una electroforesis en gel , transfiriendo las moléculas del gel a la membrana de transferencia y otras veces agregando las muestras directamente a la membrana. Después del blot, las moléculas transferidas se visualizan mediante tinción con colorantes (por ejemplo, tinción de proteínas con plata), visualización autorradiográfica de moléculas radiomarcadas (realizada antes del blot) o marcaje específico de algunas proteínas o ácidos nucleicos . Esto último se realiza con anticuerpos o sondas de hibridación que se unen solo a algunas moléculas del blot y tienen una enzima unida a ellas. Después de un lavado adecuado, esta actividad enzimática (y por lo tanto, las moléculas encontradas en la mancha) se visualizan mediante incubación con un reactivo adecuado, produciendo un depósito de color en la mancha o una reacción quimioluminiscente que se registra mediante una película fotográfica .
El Southern blot es un método que se utiliza habitualmente en biología molecular para detectar una secuencia de ADN específica en muestras de ADN. El Southern blot combina la transferencia de fragmentos de ADN separados por electroforesis a una membrana filtrante y la posterior detección de fragmentos mediante hibridación de sondas. [1]
El Western blot se utiliza para detectar proteínas específicas en muestras complejas. Las proteínas se separan primero por tamaño mediante electroforesis antes de transferirlas a una matriz de transferencia adecuada (normalmente fluoruro de polivinilideno o nitrocelulosa ) y su posterior detección con anticuerpos.
Similar al Western blot , el Far Western blot utiliza interacciones proteína-proteína para detectar la presencia de una proteína específica inmovilizada en una matriz de transferencia. Luego se utilizan anticuerpos para detectar la presencia del complejo proteína-proteína, lo que convierte al Far Western blot en un caso específico del Western blot.
El método Southwestern blot se basa en el Southern blot y se utiliza para identificar y caracterizar las proteínas que se unen al ADN por su capacidad para unirse a sondas de oligonucleótidos específicos. [2] Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel y posteriormente se transfieren a membranas de nitrocelulosa de forma similar a otros tipos de transferencia.
El método Eastern blot se utiliza para detectar modificaciones postraduccionales específicas de proteínas. Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel antes de transferirlas a una matriz de transferencia, donde se detectan las modificaciones postraduccionales mediante sustratos específicos (toxina del cólera, concanavalina, fosfomolibdato, etc.) o anticuerpos. [3]
El método Far Eastern Blot se utiliza para la detección de oligosacáridos ligados a lípidos . Primero se utiliza una cromatografía de capa fina de alto rendimiento para separar los lípidos por características físicas y químicas, luego se transfieren a una matriz de transferencia antes de que los oligosacáridos sean detectados por una proteína de unión específica (es decir, anticuerpos o lectinas).
El método Northern blot sirve para detectar secuencias de ARN específicas en muestras complejas. El método Northern blot primero separa las muestras por tamaño mediante electroforesis en gel antes de transferirlas a una matriz de transferencia y detectarlas con sondas de ARN marcadas.
El Northern blot inverso se diferencia tanto del Northern blot como del Southern blot en que primero se inmoviliza el ADN en una matriz de transferencia y se detectan secuencias específicas con sondas de ARN marcadas.
Un dot blot es un caso especial de cualquiera de los blots anteriores donde el analito se agrega directamente a la matriz de transferencia (y aparece como un "punto") en lugar de separar la muestra por electroforesis antes de la transferencia.