El método de transferencia Western lejano , o far-western blotting , es un método de biología molecular basado en la técnica del western blot para detectar la interacción proteína-proteína in vitro . [1] [2] Mientras que el western blot utiliza una sonda de anticuerpo para detectar una proteína de interés, el far-western blot utiliza una sonda sin anticuerpo que puede unirse a la proteína de interés. Así, mientras que el western blotting se utiliza para la detección de ciertas proteínas, el far-western blotting se emplea para detectar interacciones proteína/proteína.
En el Western blot convencional, se utiliza la electroforesis en gel para separar las proteínas de una muestra; estas proteínas se transfieren a una membrana en un paso de "transferencia". En un Western blot, las proteínas específicas se identifican luego utilizando una sonda de anticuerpos .
El método de Western blot emplea proteínas que no son anticuerpos para sondear la proteína de interés en el blot. De esta manera, se pueden identificar los socios de unión de la proteína sonda (o la proteína borrada). La proteína sonda se produce a menudo en E. coli utilizando un vector de clonación de expresión .
La proteína sonda puede luego visualizarse a través de los métodos habituales: puede estar radiomarcada, puede tener una etiqueta de afinidad específica como His o FLAG para las cuales existen anticuerpos, o puede haber un anticuerpo específico para la proteína sonda.
Dado que los extractos de células generalmente se desnaturalizan completamente al hervirlos en detergente antes de la electroforesis en gel , este enfoque es más útil para detectar interacciones que no requieren la estructura plegada nativa de la proteína de interés.