Su carrera empezó con un pequeño papel en Foreign Affaires (1935); su primer crédito en la pantalla llegó con el film de Alfred Hitchcock Secret Agent (1936).
En 1954 rodó una versión italiana de la obra Romeo y Julieta, interpretando a Capuleto.
Cabot también intervino de manera regular como panelista del concurso televisivo Stump the Stars.
En 1964, Cabot presentó la serie Suspense, y dio voz o fue narrador en diferentes proyectos, tanto cinematográficos como televisivos, antes de ser elegido para interpretar a Giles French en la serie de la CBS Family Affair, junto a Brian Keith y Kathy Garver.
Sebastian Cabot está enterrado en el Cementerio Westwood Village Memorial Park de Los Ángeles, California.