stringtranslate.com

Komagataella

Komagataella es una levadura metilotrófica del orden Saccharomycetales . Fue descubierta en la década de 1960 como Pichia pastoris , con su característica de utilizar metanol como fuente de carbono y energía. [2] En 1995, P. pastoris fue reasignada como única representante del género Komagataella , pasando a ser Komagataella phaffii . [3] Estudios posteriores han distinguido nuevas especies en este género, dando como resultado un total de 7 especies reconocidas. [4] No es raro ver el antiguo nombre todavía en uso en el contexto de la producción de proteínas, a partir de 2023; [5] en un uso menos formal, la levadura puede denominarse confusamente pichia .

Tras años de estudio, la Komagataella se utiliza ampliamente en la investigación bioquímica y en las industrias biotecnológicas . Con un gran potencial como sistema de expresión para la producción de proteínas , además de ser un organismo modelo para el estudio genético, la Komagataella phaffii se ha vuelto importante para la investigación biológica y las aplicaciones biotecnológicas. [1] [5]

Taxonomía

Según GBIF : [4]

KomagataellaEn la naturaleza

Hábitat natural

En la naturaleza, Komagataella se encuentra en árboles, como los castaños . [7] Son heterótrofos y pueden utilizar varias fuentes de carbono para vivir, como la glucosa , el glicerol y el metanol . [8] Sin embargo, no pueden utilizar la lactosa .

Reproducción

La Komagataella puede reproducirse tanto asexualmente como sexualmente , por gemación y ascosporación . [9] En este caso, existen dos tipos de células de Komagataella : células haploides y diploides . En el ciclo de vida asexual , las células haploides experimentan mitosis para reproducirse. En el ciclo de vida sexual, las células diploides experimentan esporulación y meiosis . [10] La tasa de crecimiento de sus colonias puede variar en un amplio rango, desde cerca de 0 hasta un tiempo de duplicación de una hora, lo que es adecuado para procesos industriales. [11]

Komagataellacomo organismo modelo

En los últimos años, se ha investigado a Komagataella y se la ha identificado como un buen organismo modelo con varias ventajas. En primer lugar, Komagataella se puede cultivar y utilizar fácilmente en el laboratorio. Al igual que otros modelos de levadura ampliamente utilizados, tiene una vida útil relativamente corta y un tiempo de regeneración rápido. Además, se han diseñado algunos medios de cultivo económicos, de modo que Komagataella pueda crecer rápidamente en ellos, con una alta densidad celular. [12] Se ha realizado la secuenciación completa del genoma de Komagataella . El genoma de K. phaffii GS115 ha sido secuenciado por el Instituto de Biotecnología de Flandes y la Universidad de Ghent, y publicado en Nature Biotechnology . [13] La secuencia del genoma y la anotación de genes se pueden explorar a través del sistema ORCAE. Los datos genómicos completos permiten a los científicos identificar proteínas homólogas y relaciones evolutivas entre otras especies de levadura y Komagataella . Además, las siete especies fueron secuenciadas en 2022. [7] Además, Komagataella son células eucariotas individuales , lo que significa que los investigadores podrían investigar las proteínas dentro de Komagataella . Luego, se puede procesar la comparación homóloga con otras especies eucariotas más complejas, para obtener sus funciones y orígenes. [14]

Otra ventaja de Komagataella es su similitud con el modelo de levadura bien estudiado: Saccharomyces cerevisiae . Como organismo modelo para la biología, S. cerevisiae ha sido bien estudiado durante décadas y utilizado por investigadores para varios propósitos a lo largo de la historia. Los dos géneros de levadura; Pichia ( sensu lato ) y Saccharomyces , tienen condiciones de crecimiento y tolerancias similares; por lo tanto, el cultivo de Komagataella puede ser adoptado por laboratorios sin muchas modificaciones. [15] Además, a diferencia de S. cerevisiae , Komagataella tiene la capacidad de procesar funcionalmente proteínas con gran peso molecular, lo que es útil en un huésped traduccional. [16] Considerando todas las ventajas, Komagataella puede emplearse de manera útil como organismo modelo genético y experimental.

Komagataellacomo organismo modelo genético

Como organismo modelo genético, Komagataella puede utilizarse para el análisis genético y el cruzamiento genético a gran escala , con datos completos del genoma y su capacidad para llevar a cabo un procesamiento genético eucariota complejo en un genoma relativamente pequeño. Los genes funcionales para el ensamblaje de peroxisomas se investigaron comparando cepas de tipo salvaje y mutantes de Komagataella . [17]

Komagataellacomo organismo modelo experimental

Como organismo modelo experimental, Komagataella se utilizó principalmente como sistema huésped para la transformación. Debido a sus capacidades de recombinación con ADN extraño y procesamiento de proteínas grandes, se han llevado a cabo muchas investigaciones para investigar la posibilidad de producir nuevas proteínas y la función de proteínas diseñadas artificialmente, utilizando a Komagataella como huésped de transformación. [18] En la última década, Komagataella fue diseñada para construir plataformas de sistemas de expresión , que es una aplicación típica para un organismo modelo experimental estándar, como se describe a continuación.

Komagataellacomo plataforma del sistema de expresión

La Komagataella se utiliza frecuentemente como un sistema de expresión para la producción de proteínas heterólogas . Varias propiedades hacen que la Komagataella sea adecuada para esta tarea. Actualmente, se utilizan varias cepas de Komagataella con fines biotecnológicos, con diferencias significativas entre ellas en cuanto al crecimiento y la producción de proteínas. [19] Algunas variantes comunes poseen una mutación en el gen HIS4 , lo que conduce a la selección de células que se transforman con éxito con vectores de expresión . La tecnología para la integración del vector en el genoma de la Komagataella es similar a la de Saccharomyces cerevisiae . [20]

Ventaja

  1. La Komagataella puede crecer en un medio simple y económico, con una alta tasa de crecimiento. La Komagataella puede crecer tanto en matraces agitados como en un fermentador , lo que la hace adecuada tanto para la producción a pequeña como a gran escala. [21]
  2. Komagataella tiene dos genes de alcohol oxidasa , Aox1 y Aox2 , que incluyen promotores fuertemente inducibles . [22] Estos dos genes permiten a Komagataella utilizar metanol como fuente de carbono y energía. Los promotores AOX son inducidos por metanol y reprimidos por glucosa . Por lo general, el gen para la proteína deseada se introduce bajo el control del promotor Aox1 , lo que significa que la producción de proteínas puede inducirse mediante la adición de metanol al medio. Después de varias investigaciones, los científicos descubrieron que el promotor derivado del gen AOX1 en Komagataella es extremadamente adecuado para controlar la expresión de genes extraños, que se habían transformado en el genoma de Komagataella , produciendo proteínas heterólogas. [23]
  3. Gracias a una característica clave , Komagataella puede crecer con una densidad celular extremadamente alta en el cultivo. Esta característica es compatible con la expresión de proteínas heterólogas, lo que da lugar a mayores rendimientos de producción. [24]
  4. La tecnología necesaria para la manipulación genética de Komagataella es similar a la de Saccharomyces cerevisiae , que es uno de los organismos modelo de levadura más estudiados. Como resultado, el protocolo y los materiales experimentales son fáciles de construir para Komagataella . [25]

Desventaja

Como algunas proteínas requieren chaperoninas para plegarse correctamente, Komagataella no puede producir varias proteínas, ya que no contiene las chaperonas adecuadas. Las tecnologías para introducir genes de chaperoninas de mamíferos en el genoma de la levadura y sobreexpresar las chaperoninas existentes aún requieren mejoras. [26] [27]

Comparación con otros sistemas de expresión

En la investigación estándar de biología molecular , la bacteria Escherichia coli es el organismo más frecuentemente usado para el sistema de expresión, para producir proteínas heterólogas , debido a sus características de rápida tasa de crecimiento, alta tasa de producción de proteínas, así como condiciones de crecimiento poco exigentes. La producción de proteínas en E. coli es usualmente más rápida que en Komagataella , por las siguientes razones: Las células competentes de E. coli pueden almacenarse congeladas y descongelarse antes de su uso, mientras que las células de Komagataella deben producirse inmediatamente antes de su uso. Los rendimientos de expresión en Komagataella varían entre diferentes clones , por lo que se debe examinar una gran cantidad de clones para la producción de proteínas, para encontrar el mejor productor. La mayor ventaja de Komagataella sobre E. coli es que Komagataella es capaz de formar enlaces disulfuro y glicosilaciones en proteínas, pero E. coli no puede. [28] E. coli puede producir una proteína mal plegada cuando se incluyen disulfuros en el producto final, lo que lleva a formas inactivas o insolubles de proteínas. [29]

La Saccharomyces cerevisiae, ampliamente estudiada, también se utiliza como sistema de expresión con ventajas similares a las de Komagataella sobre E. coli . Sin embargo, Komagataella tiene dos ventajas principales sobre S. cerevisiae en entornos de laboratorio e industriales:

  1. Como se mencionó anteriormente, Komagataella es un metilotrofo , lo que significa que puede crecer con metanol simple como única fuente de energía. Komagataella puede crecer rápidamente en suspensión celular con una solución de metanol razonablemente fuerte, que mataría a la mayoría de los demás microorganismos. En este caso, el sistema de expresión es económico de configurar y mantener.
  2. La Komagataella puede crecer hasta alcanzar una densidad celular muy alta. En condiciones ideales, puede multiplicarse hasta el punto en que la suspensión celular es prácticamente una pasta. Como el rendimiento proteico del sistema de expresión en un microbio es aproximadamente igual al producto de las proteínas producidas por célula, la Komagataella resulta de gran utilidad cuando se intenta producir grandes cantidades de proteínas sin equipos costosos. [28]

En comparación con otros sistemas de expresión, como las células S2 de Drosophila melanogaster y las células de ovario de hámster chino , Komagataella suele dar rendimientos mucho mejores. Generalmente, las líneas celulares de organismos multicelulares requieren tipos de medios complejos y costosos, que incluyen aminoácidos , vitaminas y otros factores de crecimiento . Estos tipos de medios aumentan significativamente el costo de producción de proteínas heterólogas. Además, Komagataella puede crecer en medios que contienen solo una fuente de carbono y una fuente de nitrógeno , lo que es adecuado para aplicaciones de etiquetado isotópico, como la RMN de proteínas . [28]

Aplicaciones industriales

La komagataella se ha utilizado en varios tipos de industrias biotecnológicas, como la industria farmacéutica . Todas las aplicaciones se basan en su capacidad de expresar proteínas.

Producción bioterapéutica

En los últimos años, Komagataella se ha utilizado para la producción de más de 500 tipos de bioterapéuticos , como el IFNγ . Al principio, un inconveniente de este sistema de expresión de proteínas es la sobreglicosilación con alta densidad de estructura de manosa , que es una causa potencial de inmunogenicidad . [30] [31] En 2006, un grupo de investigación logró crear una nueva cepa llamada YSH597. [a] Esta cepa puede expresar eritropoyetina en su forma de glicosilación normal, intercambiando las enzimas responsables de la glicosilación de tipo fúngico, con los homólogos de mamíferos. Así, el patrón de glicosilación alterado permitió que la proteína fuera completamente funcional. [32]

Producción de enzimas

En las industrias alimentarias, como las cervecerías y las panaderías, la Komagataella se utiliza para producir diferentes tipos de enzimas, como coadyuvantes de procesamiento y aditivos alimentarios , con muchas funciones. Por ejemplo, algunas enzimas producidas por la Komagataella modificada genéticamente pueden mantener el pan blando. Mientras tanto, en la cerveza, las enzimas podrían usarse para reducir la concentración de alcohol. [33] La fosfolipasa C recombinante puede desgomar aceites con alto contenido de fósforo al descomponer los fosfolípidos. [34]

En la alimentación animal, la fitasa producida por K. phaffi se utiliza para descomponer el ácido fítico , un antinutriente. [34]

Referencias

  1. ^ YSH597 se basa en la cepa NRRL-Y11430, ahora considerada parte de K. phaffi .
  1. ^ ab De Schutter, K., Lin, Y., Tiels, P. (2009). "Secuencia genómica del huésped productor de proteína recombinante Pichia pastoris". Nature Biotechnology . 27 (6): 561–566. doi : 10.1038/nbt.1544 . PMID  19465926.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  2. ^ Koichi Ogata, Hideo Nishikawa y Masahiro Ohsugi (1969). "Una levadura capaz de utilizar metanol". Química agrícola y biológica . 33 (10): 1519–1520. doi :10.1080/00021369.1969.10859497.
  3. ^ Yamada, Yuzo; Matsuda, Minako; Maeda, Kojiro; Mikata, Kozaburo (enero de 1995). "Las relaciones filogenéticas de las levaduras que asimilan metanol basadas en las secuencias parciales de los ARN ribosómicos 18S y 26S: la propuesta de Komagataella Gen. Nov. (Saccharomycetaceae)". Biociencia, biotecnología y bioquímica . 59 (3): 439–444. doi :10.1271/bbb.59.439. PMID  7766181.
  4. ^ ab "Komagataella Y.Yamada, M.Matsuda, K.Maeda y Mikata, 1995". www.gbif.org .
  5. ^ ab Heistinger, Lina; Gasser, Brigitte; Mattanovich, Diethard (1 de julio de 2020). "Perfil microbiano: Komagataella phaffii: una levadura biotecnológica devoradora de metanol anteriormente conocida como Pichia pastoris". Microbiología . 166 (7): 614–616. doi : 10.1099/mic.0.000958 . ISSN  1350-0872. PMID  32720891.
  6. ^ Kurtzman, Cletus Paul (noviembre de 2009). "Las cepas biotecnológicas de Komagataella (Pichia) pastoris son Komagataella phaffii, según se determinó a partir del análisis de secuencias multigénicas". Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology . 36 (11): 1435–1438. doi : 10.1007/s10295-009-0638-4 . PMID  19760441.
  7. ^ ab Heistinger, L; Dohm, JC; Paes, BG; Koizar, D; Troyer, C; Ata, Ö; Steininger-Mairinger, T; Mattanovich, D (25 de abril de 2022). "La diversidad genotípica y fenotípica entre las especies de Komagataella revela una vía oculta para la utilización de la xilosa". Microbial Cell Factories . 21 (1): 70. doi : 10.1186/s12934-022-01796-3 . PMC 9036795 . PMID  35468837. 
  8. ^ Rebnegger, C., Vos, T., Graf, AB, Valli, M., Pronk, JT, Daran-Lapujade, P., y Mattanovich, D. (2016). "Pichia pastoris exhibe alta viabilidad y un bajo requerimiento de energía de mantenimiento a tasas de crecimiento específicas cercanas a cero". Applied and Environmental Microbiology . 82 (15): 4570–4583. Bibcode :2016ApEnM..82.4570R. doi : 10.1128/AEM.00638-16 . PMC 4984280 . PMID  27208115. {{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  9. ^ Kurtzman (1998). "42 - Pichia EC Hansen emend. Kurtzman". Las levaduras: un estudio taxonómico . 1 : 273–352. doi :10.1016/B978-044481312-1/50046-0. ISBN 9780444813121.
  10. ^ Zörgö E, Chwialkowska K, Gjuvsland AB, Garré E, Sunnerhagen P, Liti G, Blomberg A, Omholt SW, Warringer J (2013). "Compensaciones evolutivas antiguas entre los estados de ploidía de la levadura". PLOS Genetics . 9 (3): e1003388. doi : 10.1371/journal.pgen.1003388 . PMC 3605057 . PMID  23555297. {{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  11. ^ Kastilan, R., Boes, A., Spiegel, H. (2017). "Mejora de un proceso de fermentación para la producción de dos vacunas candidatas contra la malaria basadas en PfAMA1-DiCo en Pichia pastoris". Nature . 1 (1): 7. Bibcode :2017NatSR...711991K. doi : 10.1038/s41598-017-11819-4 . PMC 5607246 . PMID  28931852. {{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  12. ^ MM Guarna GJ Lesnicki BM Tam J. Robinson CZ Radziminski D. Hasenwinkle A. Boraston E. Jervis RTA MacGillivray RFB Turner DG Kilburn (1997). "Monitoreo y control en línea de la concentración de metanol en cultivos en matraz agitado de Pichia pastoris". Biotecnología y bioingeniería . 56 (3): 279–286. doi :10.1002/(SICI)1097-0290(19971105)56:3<279::AID-BIT5>3.0.CO;2-G. PMID  18636643.
  13. ^ De Schutter K, Lin YC, Tiels P, Van Hecke A, Glinka S, Weber-Lehmann J, Rouzé P, Van de Peer Y, Callewaert N (junio de 2009). "Secuencia del genoma del huésped de producción de proteínas recombinantes Pichia pastoris". Biotecnología de la Naturaleza . 27 (6): 561–6. doi : 10.1038/nbt.1544 . PMID  19465926.
  14. ^ Brigitte Gasser, Roland Prielhofer, Hans Marx, Michael Maurer, Justyna Nocon, Matthias Steiger, Verena Puxbaum, Michael Sauer y Diethard Mattanovich (2013). "Pichia pastoris: huésped productor de proteínas y organismo modelo para la investigación biomédica". Future Microbiology . 8 (2): 191–208. doi :10.2217/fmb.12.133. PMID  23374125.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  15. ^ Tran, A., Nguyen, T., Nguyen, C. (2017). "Pichia pastoris versus Saccharomyces cerevisiae: un estudio de caso sobre la producción recombinante del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos humanos". BMC Res Notes . 10 (1): 148. doi : 10.1186/s13104-017-2471-6 . PMC 5379694 . PMID  28376863. {{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  16. ^ Heidebrecht, Aniela y Thomas Scheibel (2013). "Producción recombinante de proteínas de seda de araña". Avances en microbiología aplicada . 82 : 115–153. doi :10.1016/B978-0-12-407679-2.00004-1. ISBN . 9780124076792. Número de identificación personal  23415154.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  17. ^ Gould, SJ, McCollum, D., Spong, AP, Heyman, JA y Subramani, S. (1992). "Desarrollo de la levadura Pichia pastoris como organismo modelo para un análisis genético y molecular del ensamblaje de peroxisomas". Las levaduras: un estudio taxonómico . 8 (8): 613–628. doi :10.1002/yea.320080805. PMID  1441741. S2CID  8840145.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  18. ^ Cregg, JM, Barringer, KJ, Hessler, AY y Madden, KR (1985). "Pichia pastoris como sistema hospedador para transformaciones". Biología molecular y celular . 5 (12): 3376–3385. doi :10.1128/MCB.5.12.3376. PMC 369166 . PMID  3915774. {{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  19. ^ Brady, JR (2020). "El análisis comparativo a escala del genoma de las variantes de Pichia pastoris informa la selección de una cepa base óptima". Biotecnología y bioingeniería . 117 (2): 543–555. doi :10.1002/bit.27209. PMC 7003935 . PMID  31654411. 
  20. ^ Higgins, DR y Cregg, JM (1998). "Introducción a Pichia pastoris". Protocolos de Pichia . Métodos en biología molecular. Vol. 103. págs. 1–15. doi :10.1385/0-89603-421-6:1. ISBN 0-89603-421-6. Número de identificación personal  9680629.{{cite book}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  21. ^ Wenhui Zhang Mark A. Bevins Bradley A. Plantz Leonard A. Smith Michael M. Meagher. (2000). "Modelado del crecimiento de Pichia pastoris en metanol y optimización de la producción de una proteína recombinante, el fragmento C de la cadena pesada de la neurotoxina botulínica, serotipo A". Biotecnología y bioingeniería . 70 (1): 1–8. doi :10.1002/1097-0290(20001005)70:1<1::AID-BIT1>3.0.CO;2-Y. PMID  10940857.
  22. ^ Daly R, Hearn MT (2005). "Expresión de proteínas heterólogas en Pichia pastoris: una herramienta experimental útil en la ingeniería y producción de proteínas". Journal of Molecular Recognition . 18 (2): 119–38. doi :10.1002/jmr.687. PMID  15565717. S2CID  7476149.
  23. ^ Romanos, Mike. (1995). "Avances en el uso de Pichia pastoris para expresión génica de alto nivel". Current Opinion in Biotechnology . 6 (5): 527–533. doi :10.1016/0958-1669(95)80087-5.
  24. ^ Zhou, X., Yu, Y., Tao, J., y Yu, L. (2014). "Producción de LYZL6, una nueva lisozima humana de tipo C, en Pichia pastoris recombinante empleando fermentación por lotes alimentados de alta densidad celular". Journal of Bioscience and Bioengineering . 118 (4): 420–425. doi :10.1016/j.jbiosc.2014.03.009. PMID  24745549.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  25. ^ Morton, CL y Potter, PM (2000). "Comparación de células de Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, Pichia pastoris, Spodoptera frugiperda y COS7 para la expresión de genes recombinantes". Biotecnología molecular . 16 (3): 193–202. doi :10.1385/MB:16:3:193. PMID  11252804. S2CID  22792748.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  26. ^ Bankefa, OE; Wang, M; Zhu, T; Li, Y (julio de 2018). "Los homólogos de Hac1p de eucariotas superiores pueden mejorar la secreción de proteínas heterólogas en la levadura Pichia pastoris". Biotechnology Letters . 40 (7): 1149–1156. doi : 10.1007/s10529-018-2571-y . PMID  29785668. S2CID  29155989.
  27. ^ Yu, Xiao-Wei; Sun, Wei-Hong; Wang, Ying-Zheng; Xu, Yan (24 de noviembre de 2017). "Identificación de nuevos factores que mejoran la producción de proteínas recombinantes en Komagataella phaffii multicopia basada en el análisis transcriptómico de los efectos de sobreexpresión". Scientific Reports . 7 (1): 16249. Bibcode :2017NatSR...716249Y. doi : 10.1038/s41598-017-16577-x . PMC 5701153 . PMID  29176680. 
  28. ^ abc Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T (2009). "Capítulo 13 Expresión en la levadura Pichia pastoris". Guía para la purificación de proteínas, 2.ª edición . Métodos en enzimología. Vol. 463. págs. 169–89. doi :10.1016/S0076-6879(09)63013-5. ISBN 978-0-12-374536-1.PMID 19892173  .
  29. ^ Brondyk WH (2009). "Capítulo 11 Selección de un método apropiado para expresar una proteína recombinante". Guía para la purificación de proteínas, 2.ª edición . Métodos en enzimología. Vol. 463. págs. 131–47. doi :10.1016/S0076-6879(09)63011-1. ISBN 978-0-12-374536-1.PMID 19892171  .
  30. ^ Razaghi A, Tan E, Lua LH, Owens L, Karthikeyan OP, Heimann K (enero de 2017). "¿Es Pichia pastoris una plataforma realista para la producción industrial de interferón gamma humano recombinante?". Biologicals . 45 : 52–60. doi :10.1016/j.biologicals.2016.09.015. PMID  27810255. S2CID  28204059.
  31. ^ Ali Razaghi; Roger Huerlimann; Leigh Owens; Kirsten Heimann (2015). "Aumento de la expresión y secreción de hIFNγ recombinante a través de la presión selectiva inducida por la inanición de aminoácidos en el gen HIS4 adyacente en Pichia pastoris" (PDF) . Revista farmacéutica europea . 62 (2): 43–50. doi : 10.1515/afpuc-2015-0031 .
  32. ^ Hamilton SR, Davidson RC, Sethuraman N, Nett JH, Jiang Y, Rios S, Bobrowicz P, Stadheim TA, Li H, Choi BK, Hopkins D, Wischnewski H, Roser J, Mitchell T, Strawbridge RR, Hoopes J, Wildt S, Gerngross TU (septiembre de 2006). "Humanización de la levadura para producir glicoproteínas complejas terminalmente sialiladas". Science . 313 (5792): 1441–3. Bibcode :2006Sci...313.1441H. doi :10.1126/science.1130256. PMID  16960007. S2CID  43334198.
  33. ^ Spohner, SC, Müller, H., Quitmann, H. y Czermak, P. (2015). "Expresión de enzimas para su uso en la industria alimentaria y de piensos con Pichia pastoris". Revista de biotecnología . 202 : 420–425. doi :10.1016/j.jbiotec.2015.01.027. PMID  25687104.{{cite journal}}: CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
  34. ^ ab Barone, GD; Emmerstorfer-Augustin, A; Biundo, A; Pisano, yo; Coccetti, P; Mapelli, V; Camattari, A (26 de febrero de 2023). "Producción Industrial de Proteínas con Pichia pastoris-Komagataella phaffii". Biomoléculas . 13 (3): 441. doi : 10.3390/biom13030441 . PMC 10046876 . PMID  36979376.