En enzimología , una xilosa isomerasa ( EC 5.3.1.5) es una enzima que cataliza la interconversión de D-xilosa y D-xilulosa . Esta enzima pertenece a la familia de las isomerasas , concretamente a las oxidorreductasas intramoleculares que interconvierten aldosas y cetosas . La isomerasa se ha observado actualmente en casi un centenar de especies de bacterias. [2] Las xilosa -isomerasas también se denominan comúnmente fructosa-isomerasas debido a su capacidad para interconvertir glucosa y fructosa. El nombre sistemático de esta clase de enzimas es D-xilosa aldosa-cetosa-isomerasa. Otros nombres de uso común incluyen D-xilosa isomerasa, D-xilosa cetoisomerasa y D-xilosa cetol-isomerasa. [3]
Historia
La actividad de la D-xilosa isomerasa fue observada por primera vez por Mitsuhashi y Lampen en 1953 en la bacteria Lactobacillus pentosus . [4] La producción artificial a través de E. coli transformada también ha tenido éxito. [5] En 1957, Kooi y Marshall observaron la actividad de la D-xilosa isomerasa en la conversión de D-glucosa a D-fructosa. [6] Ahora se sabe que las isomerasas tienen una amplia especificidad de sustrato. La mayoría de las pentosas y algunas hexosas son sustratos de la D-xilosa isomerasa. Algunos ejemplos incluyen: D-ribosa, L-arabinosa, L-ramnosa y D-alosa. [7]
La conversión de glucosa en fructosa mediante xilosa isomerasa se patentó por primera vez en la década de 1960; sin embargo, el proceso no era industrialmente viable ya que las enzimas estaban suspendidas en solución y el reciclaje de la enzima era problemático. [7] Takanashi desarrolló por primera vez en Japón una xilosa isomerasa inmóvil que se fijaba sobre una superficie sólida. [7] Estos avances fueron esenciales para el desarrollo de procesos de fermentación industrial utilizados en la fabricación de jarabe de maíz con alto contenido de fructosa . [8] : 27 [9] : 808–813 [10]
La estructura terciaria se determinó para varias xilosa isomerasas de microbios a partir de mediados de la década de 1980 ( Streptomyces olivochromogenes en 1988, Streptomyces violaceoniger en 1988, Streptomyces rubiginosus en 1984, Arthrobacter B3728 en 1986, Actinoplanes missouriensis en 1992 y Clostridium thermosulfurogenes en 199). 0). [8] : 366
Función
Esta enzima participa en las interconversiones de pentosas y glucuronatos y en el metabolismo de la fructosa y manosa . Los azúcares más biodisponibles según la Sociedad Internacional de Azúcares Raros son: glucosa, galactosa, manosa, fructosa, xilosa, ribosa y L-arabinosa. Veinte hexosas y nueve pentosas, incluida la xilulosa, se consideraban "azúcares raros". Por lo tanto, se utiliza D-xilosa isomerasa para producir estos azúcares raros que tienen aplicaciones muy importantes en biología a pesar de su baja abundancia. [11]
Caracterización
La xilosa isomerasa se puede aislar del vino tinto de arroz chino, que contiene la bacteria Lactobacillus xylosus . [12] Esta bacteria fue clasificada erróneamente como L. plantarum , que normalmente crece en el azúcar L-arabinosa , y rara vez crece en D-xilosa. Se reconoció que L. xylosus se distinguía por su capacidad para crecer en D-xilosa. [13]
La xilosa isomerasa en L. xylosus tiene un peso molecular de aproximadamente 183.000 daltons. [14]
Su pH de crecimiento óptimo es aproximadamente 7,5 para L. lactis , sin embargo, cepas como la enzima xilosa de L. brevis prefieren un ambiente más alcalino. La cepa de L. lactis es estable en el rango de pH de 6,5 a 11,0, y la enzima L. brevis , que es menos tolerante a los cambios de pH, muestra actividad en el rango de pH de 5,7 a 7,0. [14] Kei Y. y Noritaka T. también realizaron pruebas térmicas y se descubrió que la xilosa isomerasa era térmicamente estable a aproximadamente 60 grados Celsius [14]
Sitio activo y mecanismo.
La xilosa isomerasa tiene una estructura que se basa en ocho barriles alfa/beta que crean un sitio activo que contiene dos iones de magnesio divalentes. Las enzimas xilosa isomerasa exhiben un pliegue en barril TIM con el sitio activo en el centro del barril y una estructura cuaternaria tetramérica . [15] Las estructuras de PDB están disponibles en los enlaces en el cuadro de información a la derecha. La proteína es un tetrámero donde los barriles emparejados son casi coaxiales, que forman dos cavidades en las que los metales divalentes están unidos a una de las dos cavidades. Los metales tienen una geometría octaédrica. El sitio metálico 1 une firmemente el sustrato, mientras que el sitio metálico 2 une el sustrato sin apretar. Ambos comparten un residuo ácido, el ácido glutámico 216 de la enzima, que une los dos cationes. Dos aminoácidos básicos rodean los ligandos cargados negativamente para neutralizarlos. La segunda cavidad está orientada hacia la cavidad metálica y ambas cavidades comparten la misma ruta de acceso. La segunda cavidad es hidrófoba y tiene un residuo de histidina activado por un residuo de aspartato que tiene un enlace de hidrógeno . Este residuo de histidina es importante en la isomerización de la glucosa. [16]
En la isomerización de glucosa, la Histidina 53 se utiliza para catalizar la transferencia de protones de O1 a O5; A continuación se muestra el diagrama del mecanismo de apertura del anillo. El primer metal, mencionado anteriormente, se coordina con O3 y O4 y se utiliza para acoplar el sustrato. [16]
En la isomerización de xilosa, los datos de los cristales muestran que la xilosa se une a la enzima como una cadena abierta. El metal 1 se une al O2 y al O4, y una vez unido, el metal 2 se une al O1 y al O2 en el estado de transición. Estas interacciones junto con un residuo de lisina ayudan a catalizar el cambio de hidruro necesario para la isomerización. [17] [16] El estado de transición consiste en un ion carbonio de alta energía que se estabiliza a través de todas las interacciones del metal con el sustrato de azúcar. [16]
Aplicación en la industria
La aplicación más utilizada de esta enzima es la conversión de glucosa en fructosa para producir jarabe de maíz con alto contenido de fructosa (JMAF). [8] : 27 Hay tres pasos generales para producir JMAF a partir de almidón: [9] : 808–813
degradación enzimática del almidón utilizando α- amilasa . También conocido como licuación.
mayor degradación utilizando glucoamilasa y una enzima desramificante.
Producción de fructosa utilizando xilosa isomerasa.
El proceso se lleva a cabo en biorreactores a 60-65 °C. [8] : 27 Las enzimas se desnaturalizan a estas temperaturas, y un foco de investigación ha sido diseñar versiones más termoestables de la xilosa isomerasa y las otras enzimas en el proceso. [8] : 27 [18] Las enzimas generalmente se inmovilizan para aumentar el rendimiento, y encontrar mejores formas de hacerlo ha sido otro foco de investigación. [8] : 358–360 [19]
La xilosa isomerasa es una de las enzimas utilizadas por las bacterias en la naturaleza para utilizar la hemicelulosa como fuente de energía, y otro foco de investigación industrial y académica ha sido el desarrollo de versiones de xilosa isomerasa que podrían ser útiles en la producción de biocombustibles . [8] : 358 [20] [21]
Como suplemento dietético
La capacidad de la xilosa isomerasa para convertir glucosa y fructosa ha llevado a su propuesta como tratamiento para la malabsorción de fructosa. [22] [23] Esta enzima se utiliza en entornos industriales y se ha demostrado que no produce ninguna respuesta alérgica en humanos. [22]
Los productos que contienen xilosa isomerasa se venden como suplementos dietéticos de venta libre (OTC) para combatir la malabsorción de fructosa , bajo marcas que incluyen Fructaid , Fructease , Fructase , Fructose Digest y Fructosin . Aparte de las preocupaciones generales sobre la eficacia de las enzimas de venta libre, [24] actualmente hay muy pocas investigaciones disponibles sobre la xilosa-isomerasa como suplemento dietético, [25] [22] y el único estudio científico [26] indica un efecto positivo sobre náuseas y dolor abdominal relacionados con la malabsorción, pero ninguno por hinchazón. [23] [25] [22] Esta disminución en la excreción de hidrógeno en el aliento demostrada en este estudio es una señal potencial de que la fructosa se absorbió mucho mejor. [22] Sin embargo, los resultados de este estudio no fueron confirmados por otros estudios, y este estudio no evaluó los efectos a largo plazo sobre la salud y no intentó determinar qué pacientes son los más adecuados para el tratamiento con xilosa isomerasa, en todo caso. [22] [23]
Referencias
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Lectura adicional
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