Método microbiológico y bioquímico para identificación
La prueba de la oxidasa se utiliza para determinar si un organismo posee la enzima citocromo c oxidasa . La prueba se utiliza como ayuda para la diferenciación de especies de Neisseria , Moraxella , Campylobacter y Pasteurella (oxidasa positiva). También se utiliza para diferenciar pseudomonas de especies relacionadas. [1]
Clasificación
Las cepas pueden ser oxidasa positivas (OX+) u oxidasa negativas (OX-).
buey+
OX+ normalmente significa que la bacteria contiene citocromo c oxidasa (también conocida como Complejo IV) y, por lo tanto, puede utilizar el oxígeno para la producción de energía mediante la conversión de O 2 en H 2 O 2 o H 2 O con una cadena de transferencia de electrones .
OX− normalmente significa que la bacteria no contiene citocromo c oxidasa y, por lo tanto, no puede usar oxígeno para la producción de energía con una cadena de transferencia de electrones o emplea un citocromo diferente para transferir electrones al oxígeno.
La prueba utiliza discos impregnados con un reactivo como N,N,N′,N′ -tetrametil- p -fenilendiamina , TMPD (o N,N -dimetil- p -fenilendiamina , DMPD, que también es un indicador redox ). El reactivo es de color azul oscuro a marrón cuando se oxida, e incoloro cuando se reduce. Las bacterias oxidasa-positivas poseen citocromo oxidasa o indofenol oxidasa (una hemoproteína que contiene hierro). [5] Ambos catalizan el transporte de electrones desde compuestos donantes ( NADH ) a aceptores de electrones (generalmente oxígeno). El reactivo de prueba TMPD actúa como un donante artificial de electrones para la enzima oxidasa. El reactivo oxidado forma el compuesto coloreado azul de indofenol . El sistema citocromo generalmente solo está presente en organismos aeróbicos que son capaces de usar oxígeno como aceptor terminal de electrones. El producto final de este metabolismo es agua o peróxido de hidrógeno (descompuesto por la catalasa ). [1]
Procedimientos
Humedezca cada disco con aproximadamente cuatro asas de inoculación de agua desionizada.
Utilice un asa para transferir asépticamente una gran masa de bacterias puras al disco.
Observe el disco durante un máximo de tres minutos. Si la zona de inoculación se torna de un azul oscuro a marrón o casi negro, el resultado es positivo. Si no se produce un cambio de color en el plazo de tres minutos, el resultado es negativo.
Como alternativa, las bacterias vivas cultivadas en placas de agar de soja tripticasa pueden prepararse utilizando una técnica estéril con inoculación por estría de una sola línea. Las placas inoculadas se incuban a 37 °C durante 24 a 48 horas para establecer colonias. Se deben utilizar preparaciones bacterianas frescas. Después de que las colonias hayan crecido en el medio, se agregan 2-3 gotas del reactivo DMPD a la superficie de cada organismo que se va a analizar.
Una prueba positiva (OX+) dará como resultado un cambio de color de violeta a púrpura, dentro de 10 a 30 segundos.
Una prueba negativa (OX-) dará como resultado un color rosa claro o ausencia de coloración.
Referencias
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