Se le da el ciclo a validar de esterilizado efectivo (por ejemplo: 15, 17, 20, etc. minutos).

El ciclo puede o no incluir carga si queremos validar el ciclo y distribución del equipo y si queremos validar la carga de trabajo.

Concluido el ciclo, la o las ampollas son incubadas a 60 °C por 48 horas para ver si se desarrolla la bacteria de control.

Se debe incubar un control positivo sin esterilizar para verificar el correcto el resultado por cambio de color.

Para la validez estadística del proceso se deberá considerar al menos un estudio en triplicado bajo las mismas condiciones de operación.