En biología molecular y genética , una transferencia es un método para transferir biomoléculas grandes ( proteínas , ADN o ARN ) a un soporte, como una membrana compuesta de nitrocelulosa , fluoruro de polivinilideno o nailon . En muchos casos, esto se hace después de una electroforesis en gel , transfiriendo las moléculas del gel a la membrana de transferencia y otras veces agregando las muestras directamente a la membrana. Después de la transferencia, las moléculas transferidas se visualizan mediante tinción con colorantes (por ejemplo, tinción con plata de proteínas), visualización autorradiográfica de moléculas radiomarcadas (realizada antes de la transferencia) o marcaje específico de algunas proteínas o ácidos nucleicos . Esto último se hace con anticuerpos o sondas de hibridación que se unen solo a algunas moléculas del blot y tienen unida una enzima . Después de un lavado adecuado, esta actividad enzimática (y, por tanto, las moléculas encontradas en la transferencia) se visualiza mediante incubación con un reactivo adecuado, generando un depósito coloreado en la transferencia o una reacción quimioluminiscente que se registra con una película fotográfica .
Una transferencia Southern es un método que se utiliza habitualmente en biología molecular para la detección de una secuencia de ADN específica en muestras de ADN. La transferencia Southern combina la transferencia de fragmentos de ADN separados por electroforesis a una membrana de filtro y la posterior detección de fragmentos mediante hibridación de sonda. [1]
Se utiliza una transferencia Western para la detección de proteínas específicas en muestras complejas. Las proteínas primero se separan por tamaño mediante electroforesis antes de transferirlas a una matriz de transferencia adecuada (generalmente fluoruro de polivinilideno o nitrocelulosa ) y su posterior detección con anticuerpos.
De manera similar a una transferencia Western , la transferencia Far-Western utiliza interacciones proteína-proteína para detectar la presencia de una proteína específica inmovilizada en una matriz de transferencia. Luego se utilizan anticuerpos para detectar la presencia del complejo proteína-proteína, lo que convierte a la transferencia Far-Western en un caso específico de la transferencia Western.
Una transferencia Southwestern se basa en la transferencia Southern y se utiliza para identificar y caracterizar proteínas de unión al ADN por su capacidad para unirse a sondas oligonucleotídicas específicas. [2] Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel y posteriormente se transfieren a membranas de nitrocelulosa de forma similar a otros tipos de transferencia.
La transferencia Eastern se utiliza para la detección de modificaciones postraduccionales específicas de proteínas. Las proteínas se separan mediante electroforesis en gel antes de transferirlas a una matriz de transferencia, tras lo cual se detectan modificaciones postraduccionales mediante sustratos específicos (toxina del cólera, concanavalina, fosfomolibdato, etc.) o anticuerpos. [3]
La transferencia del Lejano Oriente sirve para la detección de oligosacáridos unidos a lípidos . La cromatografía de capa fina de alto rendimiento se utiliza primero para separar los lípidos según sus características físicas y químicas y luego se transfiere a una matriz de transferencia antes de que los oligosacáridos sean detectados por una proteína de unión específica (es decir, anticuerpos o lectinas).
La transferencia Northern sirve para la detección de secuencias de ARN específicas en muestras complejas. La transferencia Northern primero separa las muestras por tamaño mediante electroforesis en gel antes de transferirlas a una matriz de transferencia y detectarlas con sondas de ARN marcadas.
La transferencia Northern inversa se diferencia de la transferencia Northern y Southern en que primero se inmoviliza el ADN en una matriz de transferencia y se detectan secuencias específicas con sondas de ARN marcadas.
Una transferencia puntual es un caso especial de cualquiera de las transferencias anteriores en las que el analito se agrega directamente a la matriz de transferencia (y aparece como un "punto") en lugar de separar la muestra mediante electroforesis antes de la transferencia.