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tinción H&E

Principales tipos de tinción observados en la tinción H&E.
La retina (parte del ojo ) se tiñe con hematoxilina y eosina , los núcleos celulares se tiñen de azul violeta y el material extracelular se tiñe de rosa.

La tinción con hematoxilina y eosina ( o tinción con hematoxilina y eosina o tinción con hematoxilina-eosina ; a menudo abreviada como tinción H&E o tinción HE ) es una de las principales tinciones de tejidos utilizadas en histología . [1] [2] [3] Es la tinción más utilizada en el diagnóstico médico [1] y, a menudo, es el estándar de oro . [4] Por ejemplo, cuando un patólogo observa una biopsia de un presunto cáncer , es probable que la sección histológica esté teñida con H&E.

H&E es la combinación de dos tinciones histológicas: hematoxilina y eosina . La hematoxilina tiñe los núcleos celulares de un azul violáceo y la eosina tiñe la matriz extracelular y el citoplasma de rosa, y otras estructuras adquieren diferentes tonos, matices y combinaciones de estos colores. [5] [6] Por lo tanto, un patólogo puede diferenciar fácilmente entre las partes nuclear y citoplasmática de una célula y, además, los patrones generales de coloración de la tinción muestran el diseño y la distribución general de las células y proporcionan una descripción general de la estructura de una muestra de tejido. estructura. [7] Por lo tanto, el reconocimiento de patrones, tanto por parte de los propios humanos expertos como por el software que ayuda a esos expertos (en patología digital ), proporciona información histológica.

Esta combinación de tintes fue introducida en 1877 por el químico Nicolaus Wissozky en la Universidad Imperial de Kazán en Rusia. [8] [7]

Usos

El procedimiento de tinción H&E es la tinción principal en histología [3] [7] [2] [5] en parte porque se puede realizar rápidamente, [7] no es costoso y tiñe los tejidos de tal manera que una cantidad considerable de Se revela la anatomía microscópica [9] [10] , [7] [5] [4] y se puede utilizar para diagnosticar una amplia gama de afecciones histopatológicas . [8] Los resultados de la tinción H&E no dependen demasiado de la sustancia química utilizada para fijar el tejido ni de ligeras inconsistencias en el protocolo de laboratorio, [11] y estos factores contribuyen a su uso rutinario en histología. [7]

La tinción H&E no siempre proporciona suficiente contraste para diferenciar todos los tejidos, estructuras celulares o la distribución de sustancias químicas, [9] y en estos casos se utilizan tinciones y métodos más específicos. [10] [7]

Método de aplicación

Retirada de portaobjetos de un baño de tinción con hematoxilina.

Hay muchas maneras de preparar las soluciones (formulación) de hematoxilina utilizadas en el procedimiento H&E, [11] [12] [6] además, existen muchos protocolos de laboratorio para producir portaobjetos teñidos con H&E, [9] algunos de los cuales pueden ser específicos a un determinado laboratorio. [7] Aunque no existe un procedimiento estándar, [11] [9] los resultados por convención son razonablemente consistentes en que los núcleos celulares se tiñen de azul y el citoplasma y la matriz extracelular se tiñen de rosa. [7] Los laboratorios de histología también pueden ajustar la cantidad o el tipo de tinción para un patólogo en particular. [7]

Después de recolectar los tejidos (a menudo como biopsias ) y fijarlos, generalmente se deshidratan y se embeben en cera de parafina derretida , el bloque resultante se monta en un micrótomo y se corta en rodajas finas. [6] Las rodajas se fijan a portaobjetos de microscopio, momento en el que se retira la cera con un disolvente y las rodajas de tejido adheridas a los portaobjetos se rehidratan y están listas para teñir. [6] Alternativamente, la tinción H&E es la tinción más utilizada en la cirugía de Mohs en la que los tejidos generalmente se congelan, se cortan en un criostato (un micrótomo que corta tejido congelado), se fijan en alcohol y luego se tiñen. [9]

El método de tinción H&E implica la aplicación de hematoxilina mezclada con una sal metálica o mordiente , seguido a menudo de un enjuague en una solución ácida débil para eliminar el exceso de tinción ( diferenciación ), seguido de un azulado en agua ligeramente alcalina . [13] [8] [14] Después de la aplicación de hematoxilina, el tejido se contratiñe con eosina (más comúnmente eosina Y ). [6] [8] [7]

Resultados

La hematoxilina colorea principalmente los núcleos de las células de color azul o violeta oscuro, [6] [15] [14] junto con algunos otros tejidos, como los gránulos de queratohialina y el material calcificado . La eosina tiñe el citoplasma y algunas otras estructuras, incluida la matriz extracelular , como el colágeno [5] [7] [14] en hasta cinco tonos de rosa. [8] Las estructuras eosinófilas (sustancias que se tiñen con eosina) [5] generalmente están compuestas de proteínas intracelulares o extracelulares . Los cuerpos de Lewy y los cuerpos de Mallory son ejemplos de estructuras eosinófilas. La mayor parte del citoplasma es eosinofílico y de color rosa. [10] [15] Los glóbulos rojos se tiñen de un rojo intenso. [ cita necesaria ]

Modo de acción

Aunque la hemateína , una forma oxidada de hematoxilina, [5] [16] [14] es el colorante activo (cuando se combina con un mordiente), el tinte todavía se conoce como hematoxilina . [8] [13] A menudo se considera que la hematoxilina, cuando se combina con un mordiente (más comúnmente alumbre de aluminio), "se parece" [10] a un tinte catiónico o básico, con carga positiva . [5] La eosina es un tinte aniónico (cargado negativamente) y ácido. [5] [10] La tinción de los núcleos con hemalum (una combinación de iones de aluminio y hemateína) [14] normalmente se debe a la unión del complejo colorante-metal al ADN, pero la tinción nuclear se puede obtener después de la extracción del ADN [14 ] de secciones de tejido. El mecanismo es diferente al de la tinción nuclear mediante colorantes básicos (catiónicos) como la tionina o el azul de toluidina . [10] La tinción con tintes básicos se produce sólo a partir de soluciones que son menos ácidas que el hemalum y se evita mediante una extracción química o enzimática previa de los ácidos nucleicos. Hay evidencia que indica que los enlaces coordinados, similares a los que mantienen unidos el aluminio y la hemateína, unen el complejo de hemalum al ADN y a los grupos carboxi de proteínas en la cromatina nuclear . [ cita necesaria ]

Las estructuras no tienen que ser ácidas o básicas para ser llamadas basófilas y eosinófilas; la terminología se basa en la afinidad de los componentes celulares por los colorantes. En la muestra pueden estar presentes otros colores, por ejemplo amarillo y marrón; son causadas por pigmentos intrínsecos como la melanina . Las láminas basales deben teñirse con tinción PAS o algunas tinciones de plata , si tienen que ser bien visibles. Las fibras reticulares también requieren tinción plateada. Las estructuras hidrofóbicas también tienden a permanecer claras; Estos suelen ser ricos en grasas, por ejemplo, adipocitos , mielina alrededor de los axones de las neuronas y membranas del aparato de Golgi . [ cita necesaria ]

  • Hueso, núcleos celulares (azul-violeta), matriz ósea (rosa).
    Hueso , núcleos celulares (azul-violeta), matriz ósea (rosa).
  • Carcinoma ductal in situ (DCIS) en tejido mamario, núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
    Carcinoma ductal in situ (DCIS) en tejido mamario, núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
  • Tejido pulmonar extraído de un paciente con enfisema. Núcleos celulares (azul-violeta), glóbulos rojos (rojo brillante), otros cuerpos celulares y material extracelular (rosa) y espacios aéreos (blanco).
    Tejido pulmonar extraído de un paciente con enfisema . Núcleos celulares (azul-violeta), glóbulos rojos (rojo brillante), otros cuerpos celulares y material extracelular (rosa) y espacios aéreos (blanco).
  • Tejido muscular, núcleos celulares (azul-violeta), cuerpo celular (rosa).
    Tejido muscular , núcleos celulares (azul-violeta), cuerpo celular (rosa).
  • Carcinoma basocelular de piel, núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).
    Carcinoma basocelular de piel , núcleos celulares (azul-violeta), material extracelular (rosa).

Referencias

  1. ^ ab Titford, M. (2005). "La larga historia de la hematoxilina". Biotécnica e histoquímica . 80 (2): 73–80. doi :10.1080/10520290500138372. PMID  16195172. S2CID  20338201.
  2. ^ ab Smith C (2006). "Nuestra deuda con el palo de campeche: la historia de la hematoxilina". Obs. de laboratorio médico de MLO . 38 (5): 18, 20-2. PMID  16761865.
  3. ^ ab Dapson RW, Horobin RW (2009). "Los tintes desde una perspectiva del siglo XXI". Histoquímica biotecnológica . 84 (4): 135–7. doi :10.1080/10520290902908802. PMID  19384743. S2CID  28563610.
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Lectura adicional

Enlaces externos

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Protocolo