La prueba del indol es una prueba bioquímica que se realiza en especies bacterianas para determinar la capacidad del organismo de convertir el triptófano en indol . Esta división se lleva a cabo mediante una cadena de varias enzimas intracelulares diferentes , un sistema generalmente denominado " triptofanasa ". [ cita requerida ]
El indol se genera por desaminación reductora a partir del triptófano a través de la molécula intermediaria ácido indolpirúvico. La triptofanasa cataliza la reacción de desaminación, durante la cual se elimina el grupo amina (-NH 2 ) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son indol, ácido pirúvico , amonio (NH 4 + ) y energía. Se requiere fosfato de piridoxal como coenzima .
Al igual que muchas pruebas bioquímicas en bacterias, los resultados de una prueba de indol se indican mediante un cambio de color después de una reacción con un reactivo agregado.
El cultivo bacteriano puro debe desarrollarse en caldo de triptófano o peptona estéril durante 24 a 48 horas antes de realizar la prueba. Después de la incubación, se añaden al caldo de cultivo cinco gotas de reactivo de Kovac ( alcohol isoamílico , para-dimetilaminobenzaldehído , ácido clorhídrico concentrado).
Un resultado positivo se manifiesta por la presencia de un color rojo o violeta rojizo en la capa de alcohol superficial del caldo. Un resultado negativo aparece de color amarillo. También puede darse un resultado variable, mostrando un color naranja como resultado. Esto se debe a la presencia de escatol , también conocido como metil indol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.
El color rojo positivo se forma como resultado de una serie de reacciones. El para-dimetilaminobenzaldehído reacciona con el indol presente en el medio para formar un colorante rojo rosindol. El alcohol isoamílico forma un complejo con el colorante rosindol, lo que hace que precipite . El alcohol restante y el precipitado suben a la superficie del medio.
Una variación de esta prueba que utiliza el reactivo de Ehrlich (que utiliza alcohol etílico en lugar de alcohol isoamílico, desarrollado por Paul Ehrlich ) se utiliza cuando se realiza la prueba en no fermentadores y anaerobios .
Las bacterias que dan positivo en la prueba de escisión del indol del triptófano incluyen: Aeromonas hydrophila , Aeromonas punctata , Bacillus alvei , Edwardsiella sp., Escherichia coli , Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae , Klebsiella oxytoca , Proteus sp. (no P. mirabilis ni P. penneri ), Plesiomonas shigelloides , Pasteurella multocida , Pasteurella pneumotropica , Vibrio sp. y Lactobacillus reuteri .
Las bacterias que dan resultados negativos en la prueba de indol incluyen: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida , Alcaligenes sp., la mayoría de Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., la mayoría de Haemophilus sp., la mayoría de Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia haemolytica , Pasteurella ureae , Proteus mirabilis , P. penneri , Pseudomonas sp., Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. y Rhizobium sp.
La prueba del indol es una de las cuatro pruebas de la serie IMViC , que busca evidencias de una bacteria entérica. Las otras tres pruebas son: la prueba del rojo de metilo [M], la prueba de Voges-Proskauer [V] y la prueba del citrato [C]. [1]