El cultivo de réplicas es una técnica microbiológica en la que una o más placas de Petri secundarias que contienen diferentes medios de crecimiento selectivos sólidos (a base de agar ) (que carecen de nutrientes o contienen inhibidores químicos del crecimiento como antibióticos ) se inoculan con las mismas colonias de microorganismos de una placa primaria ( o plato principal), reproduciendo el patrón espacial original de las colonias. La técnica implica presionar un disco cubierto de pana y luego imprimir placas secundarias con células en colonias extraídas de la placa original por el material. Generalmente, un gran número de colonias (aproximadamente 30-300) se replican en placas debido a la dificultad de distribuir cada una individualmente en una placa separada.
El propósito del cultivo de réplicas es poder comparar la placa maestra y cualquier placa secundaria, generalmente para detectar un fenotipo deseado . Por ejemplo, cuando una colonia que estaba presente en el plato primario (o plato maestro) no aparece en un plato secundario, muestra que la colonia era sensible a una sustancia en ese plato secundario en particular. Los fenotipos comunes que se pueden detectar incluyen auxotrofia y resistencia a los antibióticos .
El revestimiento de réplicas es especialmente útil para la " selección negativa ". Sin embargo, es más correcto referirse a "cribado negativo" en lugar de utilizar el término "selección". Por ejemplo, si uno quisiera seleccionar colonias que fueran sensibles a la ampicilina , la placa primaria podría replicarse en una placa secundaria de agar Amp + . Las colonias sensibles en la placa secundaria morirían, pero aún podrían deducirse de la placa primaria, ya que las dos tienen los mismos patrones espaciales que las colonias resistentes a la ampicilina. A continuación se pudieron separar las colonias sensibles de la placa primaria. Con frecuencia la última placa no será selectiva. En la figura, se replicará una placa no selectiva después de la placa Amp+ para confirmar que la ausencia de crecimiento en la placa selectiva se debe a la selección en sí y no a un problema con la transferencia de células. Si se ve crecimiento en la tercera placa (no selectiva) pero no en la segunda, el agente selectivo es responsable de la falta de crecimiento. Si la placa no selectiva no muestra crecimiento, no se puede decir si se transfirieron células viables y no se pueden sacar conclusiones sobre la presencia o ausencia de crecimiento en medios selectivos. Esto es particularmente útil si hay dudas sobre la edad o la viabilidad de las células en la placa original.
Al aumentar la variedad de placas secundarias con diferentes medios de crecimiento selectivos , es posible detectar rápidamente un gran número de colonias aisladas individuales para detectar tantos fenotipos como placas secundarias.
El desarrollo del revestimiento de réplicas requirió dos pasos. El primer paso fue definir el problema: un método para duplicar colonias de manera identificable. El segundo paso fue idear un medio para implementar de manera confiable el primer paso. El revestimiento de réplica fue descrito por primera vez por Esther Lederberg y Joshua Lederberg en 1952. Una de las placas de agar nutritivo tendrá resistencia a los antibióticos. [1] Lederberg buscó utilizar una tela que pudiera esterilizarse y que tuviera un pelo de tela vertical , similar a un "cepillo de alambre" analógico 2D que se había utilizado clásicamente para transferir colonias. El papel era insatisfactorio porque "su capilaridad lateral y la compresión de las colonias distorsionaban y rompían el patrón de crecimiento original", y el terciopelo de nailon era demasiado caro y sus fibras más rígidas causaban problemas, lo que llevó a la elección y eventual estandarización de la pana de algodón. [2] Si bien se demostró por primera vez con bacterias , el revestimiento de réplicas a base de pana también se ha convertido en una técnica estándar en la microbiología de eucariotas , como la levadura . [3]