La prueba de triple azúcar y hierro ( TSI ) es una prueba microbiológica que recibe su nombre por su capacidad para evaluar la capacidad de un microorganismo para fermentar azúcares y producir sulfuro de hidrógeno . [1] A menudo se utiliza para diferenciar bacterias entéricas, incluidas Salmonella y Shigella .
El tubo inclinado TSI es un tubo de ensayo que contiene agar , un colorante sensible al pH ( rojo fenol ), 1% de lactosa , 1% de sacarosa , 0,1% de glucosa , [2] y tiosulfato de sodio y sulfato ferroso o sulfato ferroso de amonio .
Todos estos ingredientes se mezclan, se calientan hasta que se esterilicen y se dejan solidificar en el tubo de ensayo en un ángulo inclinado. La forma inclinada de este medio proporciona una serie de superficies que están expuestas al aire que contiene oxígeno en distintos grados (un entorno aeróbico) o no están expuestas al aire (un entorno anaeróbico).
El medio de agar TSI se desarrolló con base en el Agar Hierro de Kligler , que había sido utilizado para la determinación de bacterias fermentadoras de lactosa, mediante la adición de sacarosa para poder detectar también bacterias fermentadoras de sacarosa. [3]
Las bacterias que fermentan cualquiera de los tres azúcares en el medio producirán subproductos. [4] Estos subproductos suelen ser ácidos, que cambiarán el color del tinte rojo sensible al pH (rojo fenol) a un color amarillo. La posición del cambio de color distingue la producción de ácido asociada con la fermentación de la glucosa de los subproductos ácidos de la fermentación de la lactosa o la sacarosa. . Si esto ocurre, el sulfuro de hidrógeno recién formado ( H
2S ) reacciona con el sulfato ferroso en el medio para formar sulfuro ferroso , que es visible como un precipitado negro. Entre los ejemplos de bacterias productoras de sulfuro se incluyen las especies Salmonella , Proteus , Citrobacter y Edwardsiella . El ennegrecimiento del medio casi siempre se observa en el extremo inferior del mismo.
Una bacteria que no fermenta la lactosa y fermenta la glucosa, inicialmente causa una inclinación amarilla/fondo amarillo (reacción ácido/ácido) después de 8 horas, pero luego se convierte en una inclinación roja/fondo amarillo después de 24 horas (reacción álcali/ácido). Mientras que si fermenta tanto lactosa como glucosa, da como resultado un tubo amarillo/amarillo y permanece así debido a la gran cantidad de ácido producido en la reacción. El ennegrecimiento del fondo debido a la producción de H2S puede enmascarar la reacción ácida (amarillo) en el fondo del tubo. Salmonella enterica serovar Typhi puede dar como resultado el ennegrecimiento del medio en la interfaz del fondo y la inclinación.
En condiciones anaeróbicas (como las que se dan en el fondo del tubo), algunas bacterias utilizan el tiosulfato como aceptor de electrones y lo reducen a gas hidrógeno. Este gas no es muy soluble y puede acumularse en forma de burbujas a lo largo de la vía de inoculación, entre el agar y el vidrio, o en el líquido que se acumula en el fondo del tubo inclinado. La producción de hidrógeno puede levantar el agar del extremo del tubo o fracturarlo (agrietarlo). El dióxido de carbono, si se produce, puede no aparecer en forma de burbujas porque es mucho más soluble en el medio.