Los anticuerpos primarios y secundarios son dos grupos de anticuerpos que se clasifican en función de si se unen a antígenos o proteínas directamente o se dirigen a otro anticuerpo (primario) que, a su vez, está unido a un antígeno o proteína .
Un anticuerpo primario puede ser muy útil para la detección de biomarcadores de enfermedades como el cáncer, la diabetes, el Parkinson y el Alzheimer y se utilizan para el estudio de la absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME) y la resistencia a múltiples fármacos (MDR) de agentes terapéuticos.
Los anticuerpos secundarios permiten la detección y amplificación de señales, además de ampliar la utilidad de un anticuerpo mediante la conjugación con proteínas. [1] Los anticuerpos secundarios son especialmente eficaces en el inmunomarcaje . Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios, que están directamente unidos al antígeno o antígenos diana. En el inmunomarcaje, el dominio Fab del anticuerpo primario se une a un antígeno y expone su dominio Fc al anticuerpo secundario. A continuación, el dominio Fab del anticuerpo secundario se une al dominio Fc del anticuerpo primario. Dado que el dominio Fc es constante dentro de la misma clase animal, solo se requiere un tipo de anticuerpo secundario para unirse a muchos tipos de anticuerpos primarios. Esto reduce el coste al etiquetar solo un tipo de anticuerpo secundario, en lugar de etiquetar varios tipos de anticuerpos primarios. Los anticuerpos secundarios ayudan a aumentar la sensibilidad y la amplificación de la señal debido a que varios anticuerpos secundarios se unen a un anticuerpo primario. [2]
Los anticuerpos secundarios de moléculas de inmunoglobulina completas son el formato más comúnmente utilizado, pero pueden procesarse enzimáticamente para permitir el refinamiento del ensayo. Los fragmentos F(ab') 2 se generan mediante digestión con pepsina para eliminar la mayor parte del fragmento Fc, lo que evita el reconocimiento por los receptores Fc en células vivas o por la proteína A o la proteína G. [3] La digestión con papaína genera fragmentos Fab, que eliminan todo el fragmento Fc, incluida la región bisagra, lo que produce dos fracciones Fab monovalentes. Se pueden utilizar para bloquear inmunoglobulinas endógenas en células, tejidos u otras superficies, y para bloquear las inmunoglobulinas expuestas en múltiples experimentos de marcaje utilizando anticuerpos primarios de la misma especie. [4]
Los anticuerpos secundarios se pueden conjugar con enzimas como la peroxidasa de rábano picante (HRP) o la fosfatasa alcalina (AP); o colorantes fluorescentes como el isotiocianato de fluoresceína (FITC), derivados de rodamina , colorantes Alexa Fluor ; u otras moléculas para su uso en diversas aplicaciones. Los anticuerpos secundarios se utilizan en muchos ensayos bioquímicos [5], incluidos: