La sal (también conocida como precipitación inducida por sal , fraccionamiento de sal , cristalización antisolvente , cristalización por precipitación o ahogamiento ) [1] es una técnica de purificación que utiliza la solubilidad reducida de ciertas moléculas en una solución de fuerza iónica muy alta . La sal se utiliza normalmente para precipitar biomoléculas grandes, como proteínas o ADN. [2] Debido a que la concentración de sal necesaria para que una proteína determinada precipite de la solución difiere de una proteína a otra, se puede usar una concentración de sal específica para precipitar una proteína objetivo. Este proceso también se utiliza para concentrar soluciones diluidas de proteínas. Se puede utilizar diálisis para eliminar la sal si es necesario.
Los compuestos salinos se disocian en soluciones acuosas. Esta propiedad se aprovecha en el proceso de salazón. Cuando aumenta la concentración de sal, algunas de las moléculas de agua son atraídas por los iones de sal , lo que disminuye la cantidad de moléculas de agua disponibles para interactuar con la parte cargada de la proteína. [3]
Hay aminoácidos hidrofóbicos y aminoácidos hidrofílicos en las moléculas de proteínas . Después del plegamiento de proteínas en solución acuosa, los aminoácidos hidrofóbicos generalmente forman áreas hidrofóbicas protegidas, mientras que los aminoácidos hidrofílicos interactúan con las moléculas de solvatación y permiten que las proteínas formen enlaces de hidrógeno con las moléculas de agua circundantes. Si una cantidad suficiente de la superficie de la proteína es hidrófila, la proteína se puede disolver en agua. [4]
Cuando se agrega sal a la solución, hay una interacción más frecuente entre las moléculas del solvente y los iones de sal. Como resultado, los iones de proteína y sal compiten para interactuar con las moléculas de solvente, con el resultado de que hay menos moléculas de solvente disponibles para interactuar con las moléculas de proteína que antes. Las interacciones proteína-proteína se vuelven así más fuertes que las interacciones disolvente-soluto y las moléculas de proteína se asocian formando interacciones hidrófobas entre sí. [5] Después de la disociación en un disolvente determinado, los átomos cargados negativamente de una sal elegida comienzan a competir por las interacciones con las moléculas cargadas positivamente presentes en la solución. De manera similar, los cationes cargados positivamente compiten por las interacciones con las moléculas cargadas negativamente del disolvente. Este proceso se conoce como salazón. [ cita necesaria ]
Los jabones se precipitan fácilmente con una solución salina concentrada, el ión metálico de la sal reacciona con los ácidos grasos formando de nuevo el jabón y el glicerol . Para separar la glicerina del jabón, la masa pastosa en ebullición se trata con salmuera (solución de NaCl). El contenido de la sal de la tetera se separa (se separa) en una capa superior que es una masa cuajada de jabón impuro y una capa inferior que consiste en una solución acuosa de sal con glicerina disuelta en ella. La solución salina ligeramente alcalina, denominada lejía gastada, se extrae del fondo de la olla o tetera y posteriormente puede tratarse para recuperar la glicerina. [ cita necesaria ]
Como diferentes proteínas tienen diferentes composiciones de aminoácidos, diferentes moléculas de proteína precipitan en diferentes concentraciones de solución salina. [ cita necesaria ]
Las proteínas no deseadas se pueden eliminar de una mezcla de solución de proteínas mediante sal, siempre que se conozca la solubilidad de la proteína en diversas concentraciones de solución salina. Después de eliminar el precipitado mediante filtración o centrifugación , la proteína deseada se puede precipitar alterando la concentración de sal hasta el nivel en el que la proteína deseada se vuelve insoluble. [6]
Una desventaja de la sal en la purificación de proteínas es que, además de precipitar una proteína de interés específica, también precipitan contaminantes. Por tanto, para obtener una proteína de interés más pura, pueden ser necesarios métodos de purificación adicionales, como la cromatografía de intercambio iónico. [7]