La inmunoperoxidasa es un tipo de inmunotinción utilizada en biología molecular , investigación médica y diagnóstico clínico. En particular, las reacciones de inmunoperoxidasa se refieren a una subclase de procedimientos inmunohistoquímicos o inmunocitoquímicos en los que los anticuerpos se visualizan mediante una reacción catalizada por peroxidasa.
La inmunohistoquímica y la inmunocitoquímica son métodos que se utilizan para determinar en qué células o partes de células se encuentra una proteína u otra macromolécula en particular. Estas tinciones utilizan anticuerpos para unirse a antígenos específicos , generalmente de origen proteico o glicoproteico . Dado que los anticuerpos normalmente son invisibles, se deben emplear estrategias especiales para detectar estos anticuerpos unidos. En un procedimiento de inmunoperoxidasa, se utiliza una enzima conocida como peroxidasa para catalizar una reacción química y producir un producto coloreado.
Simplemente, se fija una porción muy fina de tejido sobre vidrio y se incuba con un anticuerpo o una serie de anticuerpos, el último de los cuales está unido químicamente a la peroxidasa. Después de revelar la mancha añadiendo el sustrato químico , la distribución de la mancha puede examinarse mediante microscopía .
Originalmente, todos los anticuerpos producidos para la inmunotinción eran policlonales , es decir, generados por reacciones normales de anticuerpos en animales como caballos o conejos. Ahora, muchos son monoclonales , es decir, producidos en cultivo de tejidos. Los anticuerpos monoclonales que constan de un solo tipo de anticuerpo tienden a proporcionar una mayor especificidad antigénica y también tienden a ser más consistentes entre lotes.
El primer paso en la tinción con inmunoperoxidasa es la unión del anticuerpo específico (primario) a la muestra de células o tejido. La detección del anticuerpo primario se puede realizar entonces directamente (ejemplo 1) o indirectamente (ejemplos 2 y 3).
La tinción óptima depende de una serie de factores que incluyen la dilución del anticuerpo, los productos químicos de tinción, la preparación y/o fijación de las células/tejido y la duración de la incubación con anticuerpos/reactivos de tinción. Estos suelen estar determinados por prueba y error más que por cualquier tipo de enfoque sistemático.
Se pueden utilizar otras enzimas catalíticas, como la fosfatasa alcalina, en lugar de peroxidasas, tanto para métodos de tinción directos como indirectos. Alternativamente, el anticuerpo primario puede detectarse mediante un marcador fluorescente ( inmunofluorescencia ) o unirse a partículas de oro coloidal para microscopía electrónica .
La tinción con inmunoperoxidasa se utiliza en diagnóstico clínico y en investigación de laboratorio .
En el diagnóstico clínico, la inmunotinción se puede utilizar en biopsias de tejido para un estudio histopatológico más detallado . En el caso del cáncer, puede ayudar a subclasificar los tumores. La inmunotinción también se puede utilizar para ayudar a diagnosticar afecciones de la piel, glomerulonefritis y subclasificar los depósitos de amiloide . Las técnicas relacionadas también son útiles para subtipificar linfocitos , todos los cuales tienen un aspecto bastante similar en el microscopio óptico.
En la investigación de laboratorio, se pueden utilizar anticuerpos contra marcadores específicos de diferenciación celular para marcar tipos de células individuales. Esto puede permitir una mejor comprensión de los cambios mecanísticos en linajes celulares específicos resultantes de una intervención experimental particular.