Electroelución

Equipo para electroforesis en gel de elución continua bioanalítica: cámara de electroforesis, bomba peristáltica , colector de fracciones, bomba de recirculación de tampón y detector UV (en un refrigerador ), fuente de alimentación y registrador (sobre una mesa). ^[1]

La electroelución es un método utilizado para extraer un ácido nucleico o una muestra de proteína de un gel de electroforesis aplicando una corriente negativa en el plano de la dimensión más pequeña del gel, atrayendo la macromolécula a la superficie para su extracción y posterior análisis. ^[2] Por ejemplo, la electrotransferencia y la PAGE nativa preparativa se basan en el mismo principio . ^{[3] [4]}

Extracción de ADN

Con este método, se pueden recuperar fragmentos de ADN de una región particular de geles de agarosa o poliacrilamida . El trozo de gel que contiene el fragmento se corta (se corta de todo el gel) y se coloca en una bolsa de diálisis con tampón . La electroforesis hace que el ADN migre fuera del gel hacia el tampón de la bolsa de diálisis. Los fragmentos de ADN se recuperan de este tampón y se purifican, utilizando extracción con fenol-cloroformo seguida de precipitación con etanol . Este método es simple, rápido y produce una alta recuperación (75%) de fragmentos de ADN de los trozos de gel. ^[3]

Extracción de proteínas

Las proteínas se eluyen continuamente de una columna de gel y se separan en diferentes fracciones según su punto isoeléctrico . ^{[1] La PAGE nativa preparativa produce una recuperación de} metaloproteínas de más del 95 % . ^[4]

Referencias

1. Kastenholz B, Garfin DE (2010). "Aislamiento de metaloproteínas ácidas, básicas y neutras mediante QPNC-PAGE" (PDF) . Nature Precedings : 1–4. doi : 10.1038/npre.2010.4617.1 .
2. Seelert H, Krause F (2008). "Aislamiento preparativo de complejos proteicos y otras biopartículas mediante elución a partir de geles de poliacrilamida". Electroforesis . 29 (12): 2617–36. doi :10.1002/elps.200800061. PMID  18494038. S2CID  35874355.
3. Zarzosa-Álvarez, Ana L.; et al. (2010). "Electroelución de fragmentos de ADN". Journal of Visualized Experiments . 43 (43): 2136. doi :10.3791/2136. PMC 3157863 . PMID  20834225. 
4. Kastenholz, B (2004). "Electroforesis en gel de poliacrilamida continua nativa preparativa (PNC‐PAGE): un método eficiente para aislar cofactores de cadmio en sistemas biológicos". Analytical Letters . 37 (4). Informa UK Limited: 657–665. doi :10.1081/al-120029742. ISSN  0003-2719. S2CID  97636537.