Método para determinar la concentración de una especie química en una solución utilizando un reactivo de color.
El análisis colorimétrico es un método para determinar la concentración de un elemento químico o compuesto químico en una solución con la ayuda de un reactivo de color . Es aplicable tanto a compuestos orgánicos como a compuestos inorgánicos y puede usarse con o sin una etapa enzimática . El método se utiliza ampliamente en laboratorios médicos y con fines industriales, por ejemplo, el análisis de muestras de agua en relación con el tratamiento de aguas industriales .
Equipo
El equipo necesario es un colorímetro , unas cubetas y un reactivo de color adecuado. El proceso puede automatizarse, por ejemplo, mediante el uso de un AutoAnalyzer o mediante análisis de inyección de flujo . Recientemente, los análisis colorimétricos desarrollados para colorímetros se han adaptado para su uso con lectores de placas para acelerar el análisis y reducir el flujo de residuos. [1]
Métodos no enzimáticos
Ejemplos
Calcio
- Complejo de calcio + o-cresolftaleína → complejo coloreado [2]
Cobre
- Cobre + disulfonato de batocuproína → complejo coloreado [3]
creatinina
- Creatinina + picrato → complejo coloreado [4]
Hierro
- Hierro + disulfonato de batofenantrolina → complejo coloreado [5]
Fosfato (inorgánico)
- Fosfato + molibdato de amonio + ácido ascórbico → complejo de color azul [6]
Métodos enzimáticos
En el análisis enzimático (que se utiliza mucho en los laboratorios médicos ) la reacción de color va precedida de una reacción catalizada por una enzima . Como la enzima es específica de un sustrato particular , se pueden obtener resultados más precisos. El análisis enzimático siempre se lleva a cabo en una solución tampón a una temperatura específica (normalmente 37 °C) para proporcionar las condiciones óptimas para que actúen las enzimas. Siguen ejemplos.
Ejemplos
Colesterol (método CHOD-PAP)
- Colesterol + oxígeno --(enzima colesterol oxidasa )--> colestenona + peróxido de hidrógeno
- Peróxido de hidrógeno + 4- aminofenazona + fenol --(enzima peroxidasa )--> complejo coloreado + agua [7]
Glucosa (método GOD-Perid)
- Glucosa + oxígeno + agua --(enzima glucosa oxidasa )--> gluconato + peróxido de hidrógeno
- Peróxido de hidrógeno + ABTS --(enzima peroxidasa )--> complejo coloreado [8]
En este caso, ambas etapas de la reacción están catalizadas por enzimas.
Triglicéridos (método GPO-PAP)
- Triglicéridos + agua --(enzima esterasa )--> glicerol + ácido carboxílico
- Glicerol + ATP --(enzima glicerol quinasa )--> glicerol-3-fosfato + ADP
- Glicerol-3-fosfato + oxígeno --(enzima glicerol-3-fosfato oxidasa ) --> dihidroxiacetona fosfato + peróxido de hidrógeno
- Peróxido de hidrógeno + 4- aminofenazona + 4- clorofenol --(enzima peroxidasa )--> complejo coloreado [9]
Urea
- Urea + agua --(enzima ureasa )--> carbonato de amonio
- Carbonato de amonio + fenol + hipoclorito ----> complejo coloreado [10]
En este caso, sólo la primera etapa de la reacción es catalizada por una enzima. La segunda etapa es no enzimática.
Abreviaturas
- CHOD = colesterol oxidasa
- DIOS = glucosa oxidasa
- GPO = glicerol-3-fosfato oxidasa
- PAP = fenol + aminofenazona (en algunos métodos el fenol se reemplaza por 4-clorofenol , que es menos tóxico)
- POD = peroxidasa
Métodos ultravioleta
En los métodos ultravioleta (UV) no hay cambio de color visible pero el principio es exactamente el mismo, es decir, la medición de un cambio en la absorbancia de la solución. Los métodos UV suelen medir la diferencia de absorbancia a una longitud de onda de 340 nm entre la nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) y su forma reducida (NADH).
Ejemplos
piruvato
- Piruvato + NADH --(enzima lactato deshidrogenasa ) --> L-lactato + NAD [11]
Ver también
Referencias
- ^ Greenan, NS, RL Mulvaney y GK Sims. 1995. "Un método a microescala para la determinación colorimétrica de urea en extractos de suelo". Comunitario. Ciencia del suelo. Planta Anal. 26:2519-2529.
- ^ Ray Sarkar y Chauhan (1967) Anal. Bioquímica. 20:155
- ^ Zak, B. (1958) Clin. Chim. Acta. 3:328
- ^ Hawk, Oser y Summerson, Química fisiológica práctica , Churchill, Londres, 1947, págs. 839-844
- ^ Referencia a seguir
- ^ Heidari-Bafroui, Hojat; Ribeiro, Brenno; Charbaji, Amer; Anagnostopoulos, Constantino; Faghri, Mohammad (16 de octubre de 2020). "Caja de luz infrarroja portátil para mejorar los límites de detección de dispositivos de fosfato de papel". Medición . 173 : 108607. doi : 10.1016/j.measurement.2020.108607 . ISSN 0263-2241. S2CID 225140011.
- ^ Referencia a seguir
- ^ Rey y Wielinger (1970) Z. analyt. química. 252:224
- ^ Referencia a seguir
- ^ Fawcett y Scott (1960) J. Clin. Patol. 13:156
- ^ Referencia a seguir
