Agar de extracto de levadura y carbón tamponado

Medio de cultivo selectivo

El agar de extracto de levadura de carbón tamponado (BCYE) es un medio de crecimiento selectivo utilizado para cultivar o hacer crecer ciertos tipos de bacterias , particularmente la especie Gram-negativa Legionella pneumophila . ^[1] También se ha utilizado para el diagnóstico de laboratorio de queratitis por Acanthamoeba , ^[2] Francisella y Nocardia spp . Contiene el aminoácido L-cisteína y pirofosfato férrico que ayudan en el crecimiento de las especies de Legionella. El carbón dentro del medio actúa como un desintoxicante porque descompone el peróxido de hidrógeno que es tóxico para las legionelas. El extracto de levadura en BCYE es la rica fuente de nutrientes (vitaminas, nitrógeno y carbono) de los que dependen las bacterias para su crecimiento. BCYE también tiene tampón ACES que mantiene un nivel de pH óptimo para que las bacterias crezcan, que es alrededor de 6,9. [1] BCYE puede complementarse con antibióticos para seleccionar legionelas, especialmente si se examina una muestra ambiental o de agua no potable.

* El pirofosfato férrico (soluble) debe mantenerse seco y en la oscuridad.

Preparación de agar BCYE: copiado de la Guía de laboratorio de los CDC para Legionella : ^[4]

1. Añadir el tampón ACES a 940 ml de agua destilada y disolver en un baño de agua a 50 °C.
2. Lentamente, agregue suficiente KOH 1,0 N (aproximadamente 40 ml) a la solución tampón para llevar el pH a 6,9 y mezcle. (No use NaOH porque se ha descubierto que inhibe a Legionella pneumophila ).
3. En un segundo matraz, añadir carbón, extracto de levadura, alfa-ceto-glutarato y agar. Mezclar los polvos secos.
4. Vierta la solución tampón en el segundo matraz que contiene los polvos secos y mezcle.
5. Calentar cuidadosamente para disolver el agar, luego esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.
6. Coloque inmediatamente el medio en un baño de agua a 50 °C.
7. Para obtener un medio completo, agregue lentamente una solución de L-cisteína filtrada por membrana al medio y mezcle bien. La L-cisteína debe prepararse como una solución nueva.
8. Agregue lentamente el pirofosfato férrico soluble filtrado por membrana y mezcle bien. No mezcle el hierro y la cisteína antes de agregarlos al medio, ya que la L-cisteína es un agente quelante.
9. Ajuste el pH del medio a 6,9 a temperatura ambiente. Dado que los reactivos pueden variar, cada laboratorio debe determinar la cantidad de KOH necesaria. Mantenga el medio completo a 50 °C, vierta una muestra de 10 mL y controle el pH a temperatura ambiente. Cuando sea necesario, ajuste el medio completo con KOH 1,0 N o HCl 1,0. Tenga en cuenta que el pKa del tampón ACES es 6,9 a 20 °C y 6,8 a 25 °C. Su pKa se ve afectado por la temperatura (0,02 unidad de pH/o). Sin embargo, una vez que el agar se ha solidificado, el pH no parece cambiar con la temperatura, sino que permanece en 6,9.
10. Para la preparación de BCYE + antibióticos, agregue antibióticos filtrados por membrana y mezcle.
11. Para el agar BCYE + albúmina, disuelva la albúmina en agua destilada y esterilice por filtración antes de agregarla al medio.
12. Dispense 20 ml por cada placa Petri de 15 X 100 mm.

El medio debe mezclarse con frecuencia durante el vertido para mantener las partículas de carbón en suspensión. Una vez que el medio se haya solidificado, las placas deben almacenarse en bolsas de plástico en el refrigerador en un lugar oscuro. Las placas preparadas deberían durar aproximadamente 4 meses, siempre que pasen el control de calidad. ^[4]

Resultados a esperar:[2]

Las bacterias de Legionella, que son lisas, incoloras o azules o grises, se volverán más blancas y filamentosas con el tiempo y aparecerán fluorescentes de color verde y amarillo bajo la luz ultravioleta. La superficie de la colonia suele ser lisa, pero puede parecer que tiene cepas que le dan un aspecto de huevo frito cuando se observa con un microscopio.

Almacenamiento de placas BCYE:[3]

Las placas de BCYE deben almacenarse en un lugar oscuro a temperaturas de entre 2 y 8 grados Celsius. Las placas no deben congelarse ni sobrecalentarse; mantenga la exposición a la luz al mínimo. Las placas de BCYE, al igual que la mayoría de los medios de cultivo, no deben abrirse a menos que se estén utilizando y deben estar a temperatura ambiente antes de inocular cualquier cosa en el medio.

Referencias

1. "Copia archivada" (PDF) . Archivado desde el original (PDF) el 2012-06-12 . Consultado el 2012-05-11 .{{cite web}}: CS1 maint: archived copy as title (link)
2. Penland RL, Wilhelmus KR (octubre de 1998). "Diagnóstico de laboratorio de la queratitis por Acanthamoeba utilizando agar tamponado con carbón y extracto de levadura". Am. J. Ophthalmol . 126 (4): 590–2. doi :10.1016/S0002-9394(98)00125-1. PMID  9780107.
3. Aryal, Sagar (4 de enero de 2022). "Agar BCYE: composición, principio, preparación, resultados, usos". Notas sobre microbios .
4. "Enfermedad del legionario: Guía de laboratorio para el procesamiento de muestras | CDC" www.cdc.gov . 2022-10-13 . Consultado el 2024-02-09 .Este artículo incorpora texto de esta fuente, que se encuentra en el dominio público .