En microscopía , la tinción negativa es un método establecido, utilizado a menudo en microscopía de diagnóstico, para contrastar una muestra delgada con un líquido ópticamente opaco . En esta técnica, el fondo se tiñe , dejando la muestra real intacta y, por tanto, visible. Esto contrasta con la tinción positiva , en la que se tiñe la muestra real.
Para la microscopía de campo brillante , la tinción negativa generalmente se realiza utilizando un líquido de tinta negra como nigrosina y tinta china . La muestra, como un cultivo bacteriano húmedo extendido sobre un portaobjetos de vidrio, se mezcla con el tinte negativo y se deja secar. Cuando se observan con el microscopio , las células bacterianas, y quizás sus esporas , aparecen claras sobre el fondo oscuro que las rodea. Se ha desarrollado un método alternativo utilizando un rotulador resistente al agua para aplicar el tinte negativo. [1]
En el caso de la microscopía electrónica de transmisión , la opacidad a los electrones está relacionada con el número atómico , es decir, el número de protones. Algunas tinciones negativas adecuadas incluyen molibdato de amonio , acetato de uranilo , formiato de uranilo , ácido fosfotungstico , tetróxido de osmio , ferricianuro de osmio [2] y auroglucotionato. Se han elegido porque dispersan fuertemente los electrones y también se adsorben bien a la materia biológica. Las estructuras que pueden teñirse negativamente son mucho más pequeñas que las estudiadas con el microscopio óptico. En este caso, el método se utiliza para observar virus , bacterias, flagelos bacterianos , estructuras de membranas biológicas y proteínas o agregados de proteínas, todos los cuales tienen un bajo poder de dispersión de electrones. Algunos tintes, como el tetróxido de osmio y el ferricianuro de osmio, son muy activos químicamente. Como oxidantes fuertes, entrecruzan los lípidos principalmente reaccionando con enlaces carbono-carbono insaturados y, por lo tanto, fijan las membranas biológicas en muestras de tejido y las tiñen simultáneamente. [3] [4]
La elección de la tinción negativa en microscopía electrónica puede ser muy importante. Un estudio inicial de virus de plantas que utilizó inmersiones de hojas teñidas negativamente de una planta enferma mostró solo virus esféricos con una tinción y solo virus en forma de bastón con otra. La conclusión verificada fue que esta planta padecía una infección mixta por dos virus distintos. La tinción negativa tanto a nivel de microscopio óptico como de microscopio electrónico nunca debe realizarse con organismos infecciosos a menos que se sigan estrictas precauciones de seguridad. La tinción negativa suele ser un método de preparación muy suave y, por lo tanto, no reduce la posibilidad de infección del operador.
La microscopía electrónica de transmisión con tinción negativa también se ha empleado con éxito para el estudio y la identificación de agregados de lípidos acuosos como liposomas laminares (le), micelas esféricas invertidas (M) y fases cilíndricas HII hexagonales invertidas (H) (ver figura). [5]