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SYBR Verde I

SYBR Green I ( SG ) es un tinte de cianina asimétrico [1] utilizado como tinción de ácido nucleico en biología molecular . La familia de colorantes SYBR es producida por Molecular Probes Inc. , ahora propiedad de Thermo Fisher Scientific . SYBR Green I se une al ADN . El complejo de tinte de ADN resultante absorbe mejor la luz azul de 497 nanómetros (λ max = 497 nm) y emite luz verde (λ max = 520 nm). La tinción se une preferentemente al ADN bicatenario, pero teñirá el ADN monocatenario (ss) con menor rendimiento. SYBR Green también puede teñir ARN con un rendimiento inferior al del ADNss.

Una muestra de esperma de arenque teñida con SYBR Green en una cubeta iluminada por luz azul en un microscopio de epifluorescencia . El verde SYBR de la muestra se une al ADN del esperma y, una vez unido, emite fluorescencia y emite luz verde cuando se ilumina con luz azul.
Espectrograma de SYBR Green I

Usos

SYBR Green encuentra uso en varias áreas de la bioquímica y la biología molecular . Se utiliza como colorante para la cuantificación de ADN bicatenario en algunos métodos de PCR cuantitativa . [2] También se utiliza para visualizar ADN en electroforesis en gel . Se pueden usar concentraciones más altas de SYBR Green para teñir geles de agarosa con el fin de visualizar el ADN presente. Además de marcar ácidos nucleicos puros, SYBR Green también se puede utilizar para marcar ADN dentro de las células para citometría de flujo y microscopía de fluorescencia . En estos casos, puede ser necesario un tratamiento con ARNasa para reducir el fondo del ARN en las células.

Seguridad

SYBR Green I se comercializa como un reemplazo del bromuro de etidio , un mutágeno humano potencial , ya que es más seguro trabajar con él y está libre de los complejos problemas de eliminación de desechos del bromuro de etidio. Sin embargo, cualquier molécula pequeña capaz de unirse al ADN con alta afinidad es un posible carcinógeno , incluido SYBR Green.

En un estudio que utilizó la prueba de Ames , que mide la capacidad de las sustancias químicas para causar mutaciones, cuando se analizó a la misma concentración, SYBR Green I fue del orden de 30 veces menos mutagénico que el bromuro de etidio. [3]

Tintes de cianina similares

Ver también

notas y referencias

  1. ^ Cremallera H; Brunner H; Bernhagen J; Vitzthum F (2004). "Investigaciones sobre intercalación de ADN y unión a superficie por SYBR Green I, su determinación de estructura e implicaciones metodológicas". Investigación de ácidos nucleicos . 32 (12): e103. doi :10.1093/nar/gnh101. PMC  484200 . PMID  15249599.
  2. ^ Mackay IM; Arden KE; Nitsche A (marzo de 2002). "PCR en tiempo real en virología". Ácidos nucleicos Res . 30 (6): 1292–305. doi :10.1093/nar/30.6.1292. PMC 101343 . PMID  11884626. 
  3. ^ Cantante VL; Lawlor TE; Yue S (febrero de 1999). "Comparación de la mutagenicidad de la tinción de gel de ácido nucleico SYBR Green I y la mutagenicidad del bromuro de etidio en el ensayo de mutación inversa de microsomas de mamíferos/Salmonella (prueba de Ames)". Investigación de mutaciones . 439 (1): 37–47. doi :10.1016/s1383-5718(98)00172-7. PMID  10029672.