stringtranslate.com

SH-SY5Y

Las células SH-SY5Y pueden formar montículos de células indiferenciadas, que luego propagan las células diferenciadas al área circundante. Esta formación de crecimiento puede denominarse "formación demasiado fácil".

SH-SY5Y es una línea celular de origen humano utilizada en investigaciones científicas. La línea celular original, llamada SK-N-SH, a partir de la cual se subclonó, se aisló de una biopsia de médula ósea tomada de una niña de cuatro años con neuroblastoma . Las células SH-SY5Y se utilizan a menudo como modelos in vitro de función y diferenciación neuronal. Tienen fenotipo adrenérgico pero también expresan marcadores dopaminérgicos y, como tales, se han utilizado para estudiar la enfermedad de Parkinson , la neurogénesis y otras características de las células cerebrales.

Historia

SH-SY5Y fue clonado a partir de una línea derivada de una biopsia de médula ósea llamada SK-N-SH por el laboratorio de June Biedler y se informó por primera vez en 1973. [1] Un subclon similar a un neuroblasto de SK-N-SH, llamado SH-SY, fue subclonado como SH-SY5, que fue subclonado por tercera vez para producir la línea SH-SY5Y, descrita por primera vez en 1978. [2] El proceso de clonación implicó la selección de células individuales o grupos que expresan características similares a las de las neuronas. La línea SH-SY5Y es genéticamente femenina con dos cromosomas X y ningún cromosoma Y, como se esperaba dado el origen de una niña de cuatro años.

Morfología

Las células normalmente crecen en cultivos de tejidos de dos maneras distintas. Algunas crecen hasta formar grupos de células que flotan en el medio, mientras que otras forman grupos que se adhieren al plato. Las células SH-SY5Y pueden interconvertir espontáneamente entre dos fenotipos in vitro, las células similares a neuroblastos y las células epiteliales, aunque no se comprenden los mecanismos subyacentes a este proceso. [3] Sin embargo, se aprecia que la línea celular es de tipo N (neuronal), dada su morfología y la capacidad de diferenciar las células a lo largo del linaje neuronal (a diferencia de la línea celular subclonada SH-EP de tipo S, también derivado de SK-N-SH). [4] Las células con procesos cortos parecidos a neuritas espinosas migran desde estos grupos adherentes. Las células SH-SY5Y poseen un cromosoma 1 anormal, donde hay una copia adicional de un segmento 1q y se denomina trisomía 1q. Se sabe que las células SH-SY5Y son activas en la dopamina beta hidroxilasa , acetilcolinérgicas, glutamatérgicas y adenosinérgicas. Las células tienen fases de crecimiento muy diferentes, como se describe en las imágenes circundantes. Las células se propagan mediante mitosis y se diferencian extendiendo neuritas al área circundante. Mientras se dividen, las células agregadas pueden verse tan diferentes de las células diferenciadas siguiendo la celularidad tumoral del índice K'annul (TNF, por factor de necrosis tumoral), que los nuevos científicos a menudo confunden una u otra con contaminación. Las células en división pueden formar grupos de células que recuerdan su naturaleza cancerosa, pero ciertos tratamientos como el ácido retinoico , el BDNF o el TPA pueden obligar a las células a dendrificarse y diferenciarse. Además, la inducción por ácido retinoico da como resultado la inhibición del crecimiento celular y una mayor producción de noradrenalina a partir de células SH-SY5Y [5] [6]

Las células SH-SY5Y son densas y se consideran confluentes en esta etapa. El crecimiento neurítico es más pronunciado en la parte inferior de la foto.

Medios y cultivo

El cóctel de cultivo más común utilizado es una mezcla 1:1 de DMEM y medio Ham's F12 y un 10% de suero bovino fetal suplementario . El DMEM suele contener 3,7 g/l de bicarbonato de sodio , 2 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sodio y 0,1 mM de aminoácidos no esenciales . [7] Las células siempre se cultivan a 37 grados Celsius con 95% de aire y 5% de dióxido de carbono . Se recomienda cultivar las células en matraces recubiertos para la adhesión del cultivo celular, lo que ayudará a la diferenciación y dendrificación del neuroblastoma. En general, las células son bastante robustas y crecerán en los medios de cultivo de tejidos más utilizados. Sin embargo, recientemente se ha establecido que DMEM es superior a DMEM:F12 para la propagación de SH-SY5Y. [8]

El tiempo de duplicación de las células SH-SY5Y durante la fase exponencial es de 67,3 h ± 5,8 h. El tiempo promedio de generación (G) fue de 4.23 ± 0.84 d, la tasa de división por unidad celular (r) fue de 0.25 ± 0.05 y el factor de multiplicación (V) fue de 3.49 ± 1.21. Las células SH-SY5Y muestran parámetros relacionados con el crecimiento que eran típicos o incluso superiores a muchas líneas celulares inmortalizadas derivadas de tumores descritas. La capacidad de proliferación es estable en el tiempo y también más allá del paso 10. [9]

SH-SY5Y tiene actividad dopamina-β-hidroxilasa y puede convertir la dopamina en norepinefrina. También formará tumores en ratones desnudos en aproximadamente 3 a 4 semanas. La pérdida de características neuronales se ha descrito a medida que aumenta el número de pases. Por lo tanto, se recomienda no utilizar después del paso 20 ni verificar características específicas como la captación de noradrenalina o marcadores tumorales neuronales.

Referencias

  1. ^ Biedler JL, Helson L, Spengler BA (noviembre de 1973). "Morfología y crecimiento, tumorigenicidad y citogenética de células de neuroblastoma humano en cultivo continuo". Res. Cáncer . 33 (11): 2643–52. PMID  4748425.
  2. ^ Biedler JL, Roffler-Tarlov S, Schachner M, Freedman LS (noviembre de 1978). "Síntesis de múltiples neurotransmisores mediante clones y líneas celulares de neuroblastoma humano". Res. Cáncer . 38 (11 parte 1): 3751–7. PMID  29704.
  3. ^ Feles, Sebastián; Overath, cristiano; Reichardt, Sina; Diegeler, Sebastián; Schmitz, Claudia; Kronenberg, Jessica; Baumstark-Khan, Christa; Hemmersbach, Ruth; Hellweg, Christine E.; Liemersdorf, Christian (agosto de 2022). "Simplificación de las condiciones de cultivo para la línea celular de neuroblastoma SH-SY5Y: un requisito previo para los estudios funcionales". Métodos y Protocolos . 5 (4): 58.doi : 10.3390 /mps5040058 . PMC 9326679 . PMID  35893584. 
  4. ^ La Quaglia Michael P.; Manchester Karen M. (1996). "Un análisis comparativo de líneas celulares de neuroblastoma humano neuroblástico y adherente al sustrato". Revista de cirugía pediátrica . 31 (2): 315–318. doi :10.1016/S0022-3468(96)90025-1. PMID  8938368.
  5. ^ Girardi CS, Rostirolla DC, Lini FJ, Brum PO, Delgado J, Ribeiro CT, Teixeira AA, Peixoto DO, Heimfarth L, Kunzler A, Moreira JC, Gelain DP (2019). "Los receptores nucleares RXRα y RXRβ ejercen efectos distintos y opuestos sobre la diferenciación del neuroblastoma mediada por AR". Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Investigación de células moleculares . 1866 (3): 317–328. doi : 10.1016/j.bbamcr.2018.11.014 . PMID  30529222.
  6. ^ Kunzler A, Zeidán-Chuliá F, Gasparotto J, Girardi CS, Klafke K, Petiz LL, Bortolin RC, Rostirolla DC, Zanotto-Filho A, de Bittencourt Pasquali MA, Dickson P, Dunkley P, Moreira JC, Gelain DP (2017) ). "Los cambios en el ciclo celular y la regulación positiva de los marcadores neuronales durante la neurodiferenciación SH-SY5Y por ácido retinoico están mediados por la producción de especies reactivas y el estrés oxidativo". Mol. Neurobiol . 54 (9): 6903–6916. doi :10.1007/s12035-016-0189-4. PMID  27771902. S2CID  3515130.
  7. ^ Feles, Sebastián; Overath, cristiano; Reichardt, Sina; Diegeler, Sebastián; Schmitz, Claudia; Kronenberg, Jessica; Baumstark-Khan, Christa; Hemmersbach, Ruth; Hellweg, Christine E.; Liemersdorf, Christian (12 de julio de 2022). "Simplificación de las condiciones de cultivo para la línea celular de neuroblastoma SH-SY5Y: un requisito previo para los estudios funcionales". Métodos y Protocolos . 5 (4): 58.doi : 10.3390 /mps5040058 . PMC 9326679 . PMID  35893584. 
  8. ^ Sakagami, Hiroshi; Suzuki, Ryuichiro; Shirataki, Yoshiaki; Iwama, Soichi; Nakagawa, Mika; Suzuki, Hayato; Tanaka, Kenta; Tamura, Nobuaki; Takeshima, Hiroshi (3 de noviembre de 2017). "Reevaluación del estado del cultivo de células PC12 y SH-SY5Y según la tasa de crecimiento y el consumo de aminoácidos". En vivo . 31 (6): 1089–1095. doi :10.21873/invivo.11174. PMC 5756636 . PMID  29102930. 
  9. ^ Feles, Sebastián; Overath, cristiano; Reichardt, Sina; Diegeler, Sebastián; Schmitz, Claudia; Kronenberg, Jessica; Baumstark-Khan, Christa; Hemmersbach, Ruth; Hellweg, Christine E.; Liemersdorf, Christian (12 de julio de 2022). "Simplificación de las condiciones de cultivo para la línea celular de neuroblastoma SH-SY5Y: un requisito previo para los estudios funcionales". Métodos y Protocolos . 5 (4): 58.doi : 10.3390 /mps5040058 . PMC 9326679 . PMID  35893584. 

enlaces externos