[1]​ Ingresó a la Universidad de Harvard en 1892 y en 1893 obtuvo un segundo título AB con honores.

Luego enseñó zoología en la Universidad de Wisconsin-Madison y en el Knox College, cada uno durante un año.

Corrigió algunos trabajos provisionales de Udny Yule sobre mejoramiento mediante selección deliberada y genética.

[4]​[1]​ En Harvard, Charles W. Woodworth sugirió a Castle que Drosophila podría usarse para trabajos genéticos.

[2]​[1]​ En 1896, se casó con Clara Sears Bosworth y tuvieron tres hijos, uno de los cuales murió cuando era adolescente.