Marvel's Spider-Man 2 será un videojuego de acción y aventura[9] para un solo jugador que se jugará en una perspectiva en tercera persona.
Los jugadores pueden adquirir nuevas habilidades y coleccionar varios trajes de Spider-Man.
Peter y Miles pueden intercambiarse libremente en cualquier momento durante la itinerancia libre en el mundo abierto del juego, pero tendrán misiones dedicadas tanto en la historia principal como en el contenido secundario que aprovechan específicamente sus características individuales.
Además de la jugabilidad estándar de Peter Parker, también se podrá jugar cuando esté vinculado al simbionte Venom, otorgándole zarcillos que usa durante el combate y habilidades únicas basadas en las redes.
Peter Parker comienza su primer día como profesor de física con Miles Morales entre sus alumnos, pero son interrumpidos por un ataque del devastado Sandman, lo que requiere que los Spider-Man lo sometan para calmarlo.
Despedido por abandonar la clase, Peter regresa a la casa de su difunta tía May Parker en Queens, a la que se mudó después de su muerte, para reunirse con Mary Jane Watson.
Mientras Peter y Miles supervisan el traslado de Scorpion, un vengativo Miles no logra rescatar al encarcelado Martin Li, quien previamente mató a su padre, de ser capturado por Kraven.
Peter investiga a Kraven y descubre que está cazando individuos con superpoderes por deporte.
Peter lleva el simbionte a Oscorp para que lo destruya, pero un Harry desesperado lo intercepta y lo reclama, transformándose en una criatura monstruosa.
Miles y Li ayudan a domesticarlo y convertirlo en el simbionte Anti-Venom gracias a los poderes de Li que transfirió, que puede destruir otros simbiontes.
El devastado padre de Harry, Norman Osborn culpa a los Spider-Man por arruinar la recuperación de Harry y visita a Otto Octavius encarcelado para exigir sus identidades secretas; pero Octavius se niega y se alegra del sufrimiento de Norman mientras escribe el "Capitulo Final".
Mientras tanto, Miles completa su ensayo universitario y conoce al nuevo novio de Rio, Albert Moon, quien les presenta a su hija Cindy.
Carvalho también había servido como artista conceptual en las películas de Marvel Cinematic Universe (MCU).
Además comparó al Spider-Man del traje simbionte, con su tiempo dando voz al personaje Sasuke Uchiha en la serie de anime Naruto, que fue un marcado contraste en el tono con los "héroes jóvenes y valientes" que estaba acostumbrado a interpretar debido a la personalidad pesimista de Sasuke y tener que "cavar un poco" para emular la angustia del personaje.
Marvel Comics lanzó un cómic precuela relacionado el Día del cómic gratuito en mayo de 2023, escrito por el escritor de Marvel's Spider-Man, Christos Gage, e ilustrado por Ig Guara.
La narrativa, que tiene lugar después de los eventos de Miles Morales, presenta a Peter Parker, Miles Morales y Mary Jane Watson luchando por equilibrar sus responsabilidades individuales y los respectivos deberes del primero para con Nueva York como Spider-Man, y presenta a The Hood[18] como su principal antagonista, quien está intentando conseguir una tablilla supuestamente antigua encriptada con tomos mágicos para resucitar a su madre moribunda.
También se incluyen marcos y calcomanías adicionales para el Modo Foto del juego, y dos puntos de habilidad adicionales que se destinan al desbloqueo de habilidades.