Ondřej Mazuch, que actúa de defensa central, empezó su carrera futbolística en las categorías inferiores del FC Brno.
En 2006 pasó a formar parte de la primera plantilla del club.
Ha sido internacional con la selección de fútbol de la República Checa, ha jugado 4 partidos internacionales.
Con la selección sub-17 quedó subcampeón del Campeonato Europeo Sub-17 de la UEFA 2006.
En ese torneo su equipo perdió la final contra Argentina por un gol a dos.