Jugó la mayor parte de su carrera en el F. C. Barcelona, donde permaneció durante 7 temporadas y media, desde 2010 hasta 2017.

Nació en San Lorenzo, localidad ubicada en la provincia de Santa Fe.

Durante este tiempo, resaltaba como un jugador que llegaba al arco y era tranquilo; por dichos atributos, Hugo Tocalli (quien era por entonces seleccionador de los juveniles argentinos) le presentó una prueba y lo convocó para la selección argentina juvenil,[5]​ donde formó parte de las diversas categorías a lo largo de los años.

Se consagró campeón con la séptima división[5]​ y mientras disfrutaba del título, se aprestó a debutar en la selección argentina absoluta, en un partido amistoso ante Uruguay, la noche de la inauguración del estadio Ciudad de La Plata.

[7]​ En total, jugó más de cincuenta partidos en esta institución, llegando a disputar la final de la Copa Sudamericana[8]​ en 2003, para la cual debió viajar especialmente a pedido del técnico Manuel Pellegrini, dado que se encontraba disputando el Mundial Sub-20 que se desarrolló en los Emiratos Árabes[9]​ y se proclamó campeón del Torneo Clausura en 2004.

Este encuentro culminó con una ovación para Mascherano,[11]​ demostrando el respeto y la admiración que cosechó a lo largo de su formación como profesional desde los juveniles del club.

Dicha lesión lo obligó a ser intervenido quirúrgicamente y lo mantuvo alejado del terreno de juego por casi siete meses.

[19]​[17]​ En cuanto a títulos, con el timão conquistó un Campeonato Brasileño de Fútbol.

[23]​ Esta y otras fricciones se volvieron irreversibles para el jugador, que junto con Tévez, tomó la decisión de buscar un nuevo destino futbolístico.

[46]​ Las condiciones consensuadas incluyeron además, un contrato por las cuatro próximas temporadas, cobrando 5,5 millones de euros al año.

[50]​ Ello no impidió que, en el tramo final de la temporada 2010-11, tuviera un papel fundamental en el equipo catalán, supliendo con solvencia las bajas de algunos compañeros, como Carles Puyol y Éric Abidal.

[56]​ En la práctica, Mascherano logró en su primera temporada una Liga española[57]​ y una Liga de Campeones de la UEFA; esta última tras vencer en la final al Manchester United[58]​ por tres tantos contra uno.

Me parece el mejor fichaje del Barcelona en los últimos años.

[68]​ Cada vez más afianzado en la institución blaugrana, fue 2015 es elegido por sus compañeros como cuarto capitán del equipo.

[69]​ Al terminar la temporada 2015-16, en la que el Barcelona revalidó los títulos de Liga y Copa del Rey, y tras muchos rumores sobre su posible marcha del club, finalmente el 27 de julio se anuncia su renovación por tres temporadas más, hasta 2019.

[71]​[72]​[73]​ Mascherano forma parte de los cinco extranjeros que más partidos han jugado en la historia del Barcelona, junto con Lionel Messi, Daniel Alves, Phillip Cocu y Ronald Koeman.

[77]​ También había recibido una oferta del club Inter Miami de Estados Unidos, pero el jugador eligió terminar su carrera en Argentina.

[87]​ En casi todas estas competencias, a Mascherano le tocó ejercer como capitán por elección de sus respectivos compañeros y del cuerpo técnico;[88]​[89]​[90]​ teniendo notables actuaciones[91]​[92]​[93]​[94]​ y cumpliendo además, una singular estadística: en la práctica, había jugado hasta ese momento más partidos para la Selección Argentina que con la camiseta del que era su club, River Plate.

Al respecto, Mascherano daba cuenta de que, si bien era el más joven en aquel momento, eso no le interesaba, dado que lo importante era sentirse útil y «dejar dentro de la cancha la vida por la selección».

En esta competición, jugó un gran partido ante Nigeria donde la Argentina triunfó por 1 a 0 con gol de Gabriel Heinze.

Finalmente, no ingresó en prisión al aplicarle la suspensión de la condena.