Guidolin hizo su debut profesional con el equipo de la Serie A Verona en 1975, club en el que estuvo la mayoría de su carrera, excepto unas cesiones a los clubs Sambenedettese, Pistoiese y Bolonia.

En 1998, después de 4 años con fantásticos resultados con el Vicenza, Guidolin acepta ser entrenador del Udinese en la temporada 1998-1999.

La temporada 2000-2001 terminó con otra clasificación en mitad de la tabla, en noveno lugar.

Hubo una pequeña mejoría en la temporada 2001-2002, terminando en séptimo lugar, clasificándose para la Copa Intertoto, donde que fue derrotado por el Fulham en la final.

Guidolin fue nombrado entrenador del Genoa; sin embargo, después de que el equipo fuese descendido a la Serie C1 por la Federación de Fútbol por presuntos amaños, Guidolin rescindió su contrato.

Fue anunciado de forma sorprendente en la página web del equipo, reemplazado a Giuseppe Papadopoulo.

Después de una derrota 3-4 en casa frente al Parma, un equipo que luchaba por evitar el descenso, y los 7 puntos conseguidos en los 11 últimos partidos de liga, Guidolin fue cesado por el presidente del Palermo Maurizio Zamparini el 23 de abril.

[15]​ Inesperadamente, el 26 de noviembre de 2007, Guidolin fue recontratado por el Palermo, reemplazando a Stefano Colantuono y uniéndose al club siciliano por cuarta vez.

[20]​ En la temporada 2010-11 llevó al equipo a un excelente cuarto puesto en el Calcio,[21]​ que mejoró a la tercera posición en el curso 2011-12 (clasificación para la Liga de Campeones).