La Final de Ascenso 2000-01 fue una llave de definición en la cual se enfrentó el campeón del Torneo Invierno 2000: Aguascalientes, contra el campeón del Torneo Verano 2001: La Piedad, disputándose en partidos de ida y vuelta, para determinar al equipo que ascendería a la Primera División.

Disputarán el ascenso a la Primera División los campeones de los Torneos Invierno 2000 y Verano 2001.

Si al término del tiempo reglamentario el partido está empatado, se agregarán dos tiempos extras de 15 minutos cada uno.

De persistir el empate en estos periodos, se procederá a lanzar tiros penales, hasta que resulte un vencedor.

Si el Club vencedor es el mismo en los dos Torneos, se producirá el ascenso automáticamente.