Entre 2012 y 2016, interpretó a Root en Person of Interest, convirtiéndose en un personaje principal durante la tercera temporada.

Ganó el Saturn Award en 2003 a la Mejor actriz de reparto en televisión por su representación.

Se unió al reparto de Alias en 2005 para su última temporada, interpretando a la villana Kelly Peyton.

También en 2005, Acker proporcionó la voz para el personaje de Huntress en la serie animada Justice League Unlimited.

En 2012, realizó también actuaciones en Warehouse 13, Once Upon A Time y Grimm.

En 2012, interpretó a Beatrice en Much Ado About Nothing, adaptación moderna dirigida por Joss Whedon de Mucho ruido y pocas nueces, obra teatral de William Shakespeare.