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Portaobjetos de microscopio

Un conjunto de portaobjetos estándar de 75 x 25 mm. Se puede escribir sobre el área blanca para etiquetar el portaobjetos.
Un portaobjetos de microscopio (arriba) y un cubreobjetos (abajo)

Un portaobjetos de microscopio es una pieza delgada y plana de vidrio , normalmente de 75 x 26 mm (3 x 1 pulgadas) y aproximadamente 1 mm de espesor, que se utiliza para sostener objetos para su examen bajo un microscopio . Normalmente, el objeto se monta (se fija) en el portaobjetos y luego ambos se insertan juntos en el microscopio para su observación. Esta disposición permite insertar y retirar rápidamente varios objetos montados en portaobjetos del microscopio, etiquetarlos, transportarlos y almacenarlos en estuches o carpetas para portaobjetos adecuados, etc.

Los portaobjetos de microscopio suelen utilizarse junto con un cubreobjetos o un cubreobjetos, una lámina de vidrio más pequeña y delgada que se coloca sobre la muestra. Los portaobjetos se mantienen en su lugar en la platina del microscopio mediante pinzas para portaobjetos, abrazaderas para portaobjetos o una mesa en cruz que se utiliza para lograr un movimiento preciso y remoto del portaobjetos sobre la platina del microscopio (como en un sistema automatizado/operado por computadora, o donde tocar el portaobjetos con los dedos no es apropiado debido al riesgo de contaminación o la falta de precisión).

Historia

Un portaobjetos de microscopio preparado en 1855 que contiene muestras de referencia de la mucosa interna del intestino delgado de una víctima del cólera .

El origen del concepto fueron piezas de marfil o hueso , que contenían especímenes sostenidos entre discos de mica transparente , que se deslizaban hacia el espacio entre la platina y el objetivo. [1] Estos "deslizadores" fueron populares en la Inglaterra victoriana hasta que la Royal Microscopical Society introdujo el portaobjetos de vidrio estandarizado para microscopio. [2]

Dimensiones y tipos

Dimensiones comunes de portaobjetos de microscopio (en mm).

Un portaobjetos de microscopio estándar mide aproximadamente 75 mm por 25 mm (3″ por 1″) y tiene aproximadamente 1 mm de espesor. Hay una variedad de otros tamaños disponibles para diversos fines especiales, como 75 x 50 mm para uso geológico , 46 ​​x 27 mm para estudios petrográficos y 48 x 28 mm para secciones delgadas . Los portaobjetos generalmente están hechos de vidrio común y sus bordes a menudo están finamente pulidos.

Los portaobjetos de microscopio suelen estar hechos de vidrio de calidad óptica , como vidrio sódico-cálcico o vidrio de borosilicato , pero también se utilizan plásticos especiales. Los portaobjetos de cuarzo fundido se utilizan a menudo cuando la transparencia ultravioleta es importante, por ejemplo, en la microscopía de fluorescencia . [3] [4]

Aunque los portaobjetos lisos son los más comunes, existen varios tipos especializados. Un portaobjetos con concavidad o con cavidad tiene una o más depresiones poco profundas ("pozos"), diseñadas para sostener objetos ligeramente más gruesos y ciertas muestras, como líquidos y cultivos de tejidos . [5] Los portaobjetos pueden tener esquinas redondeadas para mayor seguridad o robustez, o una esquina recortada para usar con una abrazadera de portaobjetos o una mesa transversal, donde el portaobjetos está asegurado por un brazo curvo con resorte que contacta una esquina, forzando la esquina opuesta del portaobjetos contra un brazo en ángulo recto que no se mueve. Si este sistema se usara con un portaobjetos que no incorporara estas esquinas recortadas, las esquinas se astillarían y el portaobjetos podría romperse. [5]

Una lámina de retícula está marcada con una cuadrícula de líneas (por ejemplo, una cuadrícula de 1 mm) que permite estimar fácilmente el tamaño de los objetos vistos con aumento y proporciona áreas de referencia para contar objetos diminutos. A veces, un cuadrado de la cuadrícula se subdivide en una cuadrícula más fina. Las láminas para aplicaciones especializadas, como los hemocitómetros para el recuento de células, pueden tener varios depósitos, canales y barreras grabados o pulidos en su superficie superior. [6] El fabricante puede imprimir , pulir con chorro de arena o depositar sobre la superficie varias marcas o máscaras permanentes , generalmente con materiales inertes como PTFE . [7]

Algunas láminas tienen un área esmerilada o recubierta de esmalte en un extremo, para etiquetarlas con un lápiz o bolígrafo. [5] Las láminas pueden tener recubrimientos especiales aplicados por el fabricante, por ejemplo, para inercia química o adhesión celular mejorada . El recubrimiento puede tener una carga eléctrica permanente para sujetar muestras delgadas o en polvo. Los recubrimientos comunes incluyen poli-L-lisina , silanos , resinas epoxi , [5] [7] o incluso oro . [8]

Montaje

Frotis de sangre para examen patológico, un ejemplo de preparación húmeda
Portaobjetos de microscopio con muestras de tejido preparadas, teñidas y etiquetadas en una carpeta estándar de 20 portaobjetos

El montaje de muestras en portaobjetos de microscopio suele ser fundamental para una visualización satisfactoria. Se le ha prestado mucha atención a este problema en los dos últimos siglos y es un área bien desarrollada con muchas técnicas especializadas y, a veces, bastante sofisticadas. Las muestras se suelen sujetar en su lugar utilizando cubreobjetos de vidrio más pequeños .

La función principal del cubreobjetos es mantener las muestras sólidas presionadas de manera plana y las muestras líquidas formadas en una capa plana de espesor uniforme. Esto es necesario porque los microscopios de alta resolución tienen una región muy estrecha dentro de la cual enfocan.

El cubreobjetos suele tener otras funciones. Mantiene la muestra en su lugar (ya sea por el peso del cubreobjetos o, en el caso de un montaje húmedo, por la tensión superficial ) y protege la muestra del polvo y el contacto accidental. Protege la lente del objetivo del microscopio del contacto con la muestra y viceversa; en la microscopía de inmersión en aceite o en la microscopía de inmersión en agua, el cubreobjetos evita el contacto entre el líquido de inmersión y la muestra. El cubreobjetos se puede pegar al portaobjetos para sellar la muestra, lo que retrasa la deshidratación y la oxidación de la muestra y también evita la contaminación. Se utilizan varios selladores, incluidos selladores comerciales, preparaciones de laboratorio o incluso esmalte de uñas transparente normal , según la muestra. Un sellador sin disolventes que se puede utilizar para muestras de células vivas es "valap", una mezcla de vaselina , lanolina y parafina en partes iguales. [9] Los cultivos microbianos y celulares se pueden cultivar directamente en el cubreobjetos antes de colocarlo en el portaobjetos, y las muestras se pueden montar permanentemente en el cubreobjetos en lugar de en el portaobjetos. [9]

Los cubreobjetos están disponibles en una variedad de tamaños y espesores. [10] El uso de un espesor incorrecto puede provocar aberraciones esféricas y una reducción de la resolución y la intensidad de la imagen. Se pueden utilizar objetivos especiales para obtener imágenes de muestras sin cubreobjetos, o pueden tener collares de corrección que permiten al usuario adaptarse a un espesor de cubreobjetos alternativo. [11] [12]

Montaje en seco

En un montaje en seco , el tipo de montaje más simple, el objeto simplemente se coloca sobre el portaobjetos. Se puede colocar un cubreobjetos encima para proteger la muestra y el objetivo del microscopio y para mantener la muestra quieta y presionada de manera plana. Este montaje se puede utilizar con éxito para ver muestras como polen, plumas, pelos, etc. También se utiliza para examinar partículas atrapadas en filtros de membrana transparentes (por ejemplo, en el análisis de polvo en suspensión ).

Montaje húmedo o montaje temporal

En un montaje húmedo , la muestra se coloca en una gota de yodo u otro líquido que se mantiene entre el portaobjetos y el cubreobjetos por tensión superficial. Este método se utiliza comúnmente, por ejemplo, para observar organismos microscópicos que crecen en el agua de estanques u otros medios líquidos, especialmente lagos.

Montaje preparado o montaje permanente

Para la investigación patológica y biológica , la muestra generalmente se somete a una preparación histológica compleja que implica fijarla para evitar la descomposición, eliminar el agua que contiene, reemplazar el agua con parafina , cortarla en secciones muy delgadas usando un micrótomo , colocar las secciones en un portaobjetos de microscopio, teñir el tejido con varias tinciones para revelar componentes específicos del tejido, aclarar el tejido para hacerlo transparente y cubrirlo con un cubreobjetos y un medio de montaje.

Monte esparcido

El montaje esparcido describe la producción de portaobjetos de microscopio palinológico suspendiendo una muestra concentrada en agua destilada , colocando las muestras en un portaobjetos y dejando que el agua se evapore . [13]

Medios de montaje

El medio de montaje es la solución en la que se incrusta la muestra, generalmente debajo de un cubreobjetos. Los líquidos simples como el agua o el glicerol pueden considerarse medios de montaje, aunque el término generalmente se refiere a compuestos que se endurecen en un montaje permanente. Los medios de montaje populares incluyen Permount , [14] y el medio de montaje de Hoyer y una gelatina de glicerina alternativa [15]. Las propiedades de un buen medio de montaje incluyen tener un índice de refracción cercano al del vidrio (1.518), no reactividad con la muestra, estabilidad en el tiempo sin cristalizar, oscurecer o cambiar el índice de refracción, solubilidad en el medio en el que se preparó la muestra (ya sea acuoso o no polar , como xileno o tolueno ), y no hacer que la mancha de la muestra se desvanezca o se filtre. [16]

Ejemplos de medios de montaje

Acuoso

Se utiliza comúnmente en citoquímica inmunofluorescente donde no se puede archivar la fluorescencia. El almacenamiento temporal debe realizarse en una cámara oscura y húmeda. Algunos ejemplos comunes son:

  1. Glicerol-PBS (9:1) con antiquench, por ejemplo, cualquiera de los siguientes [17]
    1. p-fenilendiamina
    2. galato de propilo
    3. 1,4-diazabiciclo (2,2,2)-octano (DABCO) (muy popular)
    4. Ácido ascórbico
    5. Mowiol o Gelvatol
  2. Gelatina
  3. Montar
  4. Escudo de vecta
  5. Prolongar el oro
  6. CyGEL / CyGEL Sustain (para inmovilizar células y organismos vivos no fijados)
No acuoso
Diapositiva de un espécimen holotipo de 60 años de antigüedad de un platelminto ( Lethacotyle fijiensis ) montado permanentemente en bálsamo de Canadá

Se utiliza cuando se requiere un montaje permanente.

  1. Permount (tolueno y un polímero de a-pineno, b-pineno, dipenteno, b-felandreno)
  2. Bálsamo de Canadá
  3. DPX ( D istrene 80, un poliestireno comercial , un plastificante , por ejemplo, ftalato de dibutilo y xileno )
  4. DPX nuevo (con xileno pero libre de ftalato de dibutilo cancerígeno )
  5. Entellan (con tolueno)
  6. Entellan nuevo
  7. Medio Hoyer's de haluro de Hempstead (una fórmula patentada del medio Hoyer's tradicional que contiene un 60 % de cloral , pero libre de carcinógenos conocidos)
  8. Neo-Mount (compatible con neo-clear alifático pero no compatible con solventes aromáticos como el xileno)

Contrastando con otros tipos/significados de "montaje"

A diferencia del montaje necesario para los cubreobjetos de vidrio, se puede realizar un montaje similar para la conservación de muestras más voluminosas en recipientes de vidrio en museos. Sin embargo, se realiza un tipo de montaje completamente diferente para la preparación de muestras , que puede ser para materiales biológicos o no biológicos y se subdivide a su vez en procesos de montaje de tipo "caliente" (compresión) y "frío" (moldeable). [18] [19] Aunque se denomina "montaje", es más parecido a la incrustación en histología y no debe confundirse con el montaje descrito anteriormente. El término montaje en otros campos tiene muchos otros significados.

Véase también

Referencias

  1. ^ Adam, George. Ensayos sobre el microscopio. 1798
  2. ^ Connett, Jess (4 de octubre de 2017). "El arte de lo invisible". Bristol24-7 . Consultado el 29 de marzo de 2018 .
  3. ^ Portaobjetos y cubreobjetos de microscopio de cuarzo de un sitio web comercial (Ted Pella). Consultado el 23 de enero de 2010.
  4. ^ Portaobjetos y cubreobjetos de cuarzo para microscopio Archivado el 10 de agosto de 2015 en la página del catálogo de Wayback Machine desde un sitio web comercial (SPI Supplies). Consultado el 23 de enero de 2010.
  5. ^ abcd Página del catálogo de Histología y Microscopía Óptica de un sitio web comercial (EMS). Consultado el 23 de enero de 2010.
  6. ^ "Colección de microscopía Lentz" . Consultado el 30 de mayo de 2024 .
  7. ^ Página del catálogo de portaobjetos de microscopio de un sitio web comercial (TEKDON). Consultado el 23 de enero de 2010.
  8. ^ Catálogo de portaobjetos de microscopio recubiertos de oro y kit de obtención de imágenes de ADN de un sitio web comercial (Asylum Research). Consultado el 31 de agosto de 2011.
  9. ^ ab Microscopía – Protocolos Archivado el 3 de abril de 2013 en archive.today página web de enseñanza del Moores Cancer Center, Universidad de California en San Diego. Consultado el 7 de febrero de 2013.
  10. ^ Especificaciones técnicas de GE de un sitio web comercial (Ted Pella). Consultado el 23 de enero de 2010.
  11. ^ "Collar de corrección de cubreobjetos". Centro de recursos de microscopía . Olympus . Consultado el 4 de junio de 2017 .
  12. ^ Michael W. Davidson (2010), Optical Aberrations, capítulo en el sitio web Molecular Expressions de la Universidad Estatal de Florida. Última edición: 2006-06-15 a las 14:39, consultado el 2010-01-12.
  13. ^ Zippi, Pierre A. (1991). "Técnica de montaje y localización de muestras con microscopio óptico y SEM para el estudio de muestras de montajes palinológicos de Strew". Micropaleontología . 37 (4): 407–13. Bibcode :1991MiPal..37..407Z. doi :10.2307/1485913. JSTOR  1485913.
  14. ^ "Hoja de datos de seguridad del material, medios de montaje Permount" (PDF) . Consultado el 29 de marzo de 2018 .
  15. ^ "Glicerina en gel como sustituto del preparado de Hoyer". www.mobot.org . Consultado el 29 de marzo de 2018 .
  16. ^ Ciencia de laboratorio médico: teoría y práctica por Ochei y Kolkatker, pág. 446.
  17. ^ Montaje de muestras de fluorescencia, medio de montaje y agentes de envejecimiento – Instituto de Investigación del Cerebro de la UCLA
  18. ^ Medios de montaje fríos y calientes, moldes y cámaras de presión – Ciencias de la microscopía electrónica
  19. ^ Allied High Tech – Productos Allied High Tech | Equipos de montaje metalográfico