La temporada 2000-01 de la Southern Football League fue la número 98 en la historia de la liga, una competición de fútbol inglesa .
Margate ganó la Premier Division y logró el ascenso a la Football Conference . Clevedon Town , Dorchester Town , Fisher Athletic y Halesowen Town descendieron de la Premier Division, mientras que Chelmsford City , Tiverton Town , Newport (Isle of Wight) y Hinckley United ascendieron de las Eastern y Western Division, los dos primeros como campeones. Bromsgrove Rovers y Paget Rangers descendieron al octavo nivel, mientras que Baldock Town y Witney Town de la Eastern Division se retiraron al final de la temporada.
La Premier Division estaba formada por 22 clubes, incluidos 17 clubes de la temporada anterior y cinco clubes nuevos:
La División Este estaba compuesta por 22 clubes, incluidos 17 clubes de la temporada anterior y cinco clubes nuevos:
Al final de la temporada, Langney Sports cambió su nombre a Eastbourne Borough .
La División Oeste estaba compuesta por 22 clubes, incluidos 18 clubes de la temporada anterior y cuatro clubes nuevos:
Al final de la temporada, Blakenall se fusionó con Bloxwich Town de Midland Alliance para formar Bloxwich United .