El suero bovino fetal ( SFB ) se deriva de la sangre extraída de un feto bovino mediante un sistema cerrado de recogida en el matadero . El suero fetal bovino es el suplemento sérico más utilizado para el cultivo celular in vitro de células eucariotas . Esto se debe a que tiene un nivel muy bajo de anticuerpos y contiene más factores de crecimiento , lo que permite versatilidad en muchas aplicaciones diferentes de cultivos celulares.
La proteína globular , la albúmina sérica bovina (BSA), es un componente importante del suero bovino fetal. La rica variedad de proteínas del suero fetal bovino mantiene las células cultivadas en un medio en el que pueden sobrevivir, crecer y dividirse.
Debido a que es un producto biológico, FBS no es un componente de medio completamente definido y, como tal, varía en composición entre lotes. [1] Como resultado de esto y en un intento de minimizar la posibilidad de transferencia de agentes adventicios, se han desarrollado medios químicamente definidos (CDM) y sin suero. Sin embargo, la eficacia de los medios sin suero es limitada ya que muchas líneas celulares todavía requieren suero para crecer y muchas formulaciones de medios sin suero solo pueden favorecer el crecimiento de tipos de células estrechamente definidos. [2]
FBS es un subproducto de la industria cárnica . El FBS, como ocurre con la gran mayoría del suero animal utilizado en cultivos celulares, se produce a partir de sangre extraída en mataderos comerciales de ganado que también suministra carne destinada al consumo humano. [3]
La primera etapa del proceso de producción de FBS es la recolección de sangre del feto bovino después de que el feto se extrae de la vaca sacrificada. El feto muere por falta de oxígeno al permanecer en el entorno protector del útero durante un mínimo de 15 a 20 minutos después de la muerte de la vaca. [4] La sangre se recoge asépticamente en un recipiente o bolsa de sangre estéril y luego se deja coagular. El método normal de recolección es la punción cardíaca. Esto minimiza el peligro de contaminación del suero con microorganismos del propio feto y del medio ambiente, al tiempo que maximiza el volumen de sangre recolectada. Luego se centrifuga para eliminar el coágulo de fibrina y las células sanguíneas restantes del suero de color amarillo claro (pajizo). El suero se congela antes del procesamiento adicional necesario para hacerlo adecuado para el cultivo celular. [5]
La segunda etapa del procesamiento implica la filtración, generalmente utilizando una cadena de filtración y la filtración final son tres filtros de membrana estériles de 0,1 micrones. El FBS procesado asépticamente está sujeto a estrictas pruebas de control de calidad y se suministra con un Certificado de análisis detallado. El certificado proporciona resultados completos de las pruebas e información sobre el origen del suero. Los certificados de análisis varían entre los proveedores comerciales, pero cada uno generalmente incluye los siguientes detalles: declaración de filtración, país de recolección de sangre, país de fabricación, pruebas de crecimiento celular, pruebas de esterilidad microbiana, así como detección de micoplasmas y virus, endotoxinas , hemoglobina, IgG gamma glutamil transferasa [6] y ensayos de proteína total. FBS también se puede probar para el país de recopilación. [7]
Se han planteado cuestiones éticas con respecto al proceso de extracción de sangre debido al posible sufrimiento causado al feto. Ha habido debate sobre las metodologías para la recolección de suero fetal bovino. La Asociación Internacional de la Industria del Suero (ISIA) ha publicado literatura [8] [9] que brinda detalles sobre la extensa regulación y los procesos empleados para garantizar que el suero se recolecte de manera ética. Aunque el acto de sacrificio de la madre y el tiempo que transcurre en el proceso de sacrificio antes de la recolección inducirán la pérdida del conocimiento o la muerte del feto antes de la recolección del suero, se ha postulado que la exposición de terneros vivos no nacidos al oxígeno podría hacer que ganen conciencia antes de ser asesinado, lo que resultó en un debate activo sobre la ética de la recolección de suero. [10] [11] Si bien la Asociación de la Industria acepta que ciertas organizaciones tienen preocupaciones, mantienen que todas las recolecciones de suero se realizan bajo supervisión veterinaria en mataderos registrados controlados por la autoridad competente en el país de recolección.
El suero bovino fetal está disponible comercialmente a través de muchos fabricantes y, debido a que las células cultivadas in vitro son muy sensibles, los clientes suelen probar lotes específicos para verificar la idoneidad para su tipo de célula específico. Al cambiar de un lote a otro es habitual adaptar las células al nuevo lote de material, por ejemplo, mezclando el 50% del suero antiguo con el 50% del suero nuevo y dejando que las células se aclimaten al nuevo material.
El suero se almacena congelado para preservar la estabilidad de componentes como los factores de crecimiento. Cuando se descongela el suero, es posible que se observe algo de precipitación. Este es un fenómeno normal y no compromete la calidad del suero de ninguna manera. El precipitado puede eliminarse transfiriendo el suero a tubos estériles y centrifugando durante 5 minutos a 400 × g. Para limitar la cantidad de precipitación, se recomienda descongelar el suero en el frigorífico a 2-8˚C. Durante este proceso, el suero debe agitarse periódicamente. Se deben evitar ciclos repetidos de congelación/descongelación y es aconsejable dispensar el suero en alícuotas de un solo uso antes de congelarlo. [12]
El suero producido para su uso en la industria biotecnológica y los sectores de investigación está altamente regulado. La recolección y movimiento de todos los productos derivados de animales a nivel mundial está estrictamente controlado. El control veterinario de productos derivados de animales sigue en gran medida las regulaciones establecidas por la UE (DG SANCO) y los EE.UU. (USDA). La normativa actual que regula la importación de subproductos animales a la UE está cubierta por el Reglamento (UE) 1069/2009 y el documento de implementación Reglamento (UE) 142/2011.
FBS es un producto recolectado a nivel mundial con las principales colecciones centradas en Estados Unidos, Australia, Nueva Zelanda, Canadá, Centroamérica, Sudamérica y Europa.
Se estima que las ventas de FBS en 2008 fueron de 700.000 litros a nivel mundial. [ cita necesaria ] Una fuente de 2012 estima que se fabrican alrededor de 600.000 litros anualmente, un tercio de los cuales es apto para uso farmacéutico según las buenas prácticas de fabricación . Se necesitan de 1 a 3 fetos para producir un litro de suero. [13]
Los reemplazos propuestos para FBS incluyen:
