La extracción con fenol es una técnica de laboratorio que purifica muestras de ácido nucleico utilizando una solución de fenol . El fenol es un reactivo común en la extracción porque sus propiedades permiten una extracción eficaz de ácidos nucleicos, particularmente porque desnaturaliza fuertemente las proteínas, es un conservante de ácidos nucleicos y es inmiscible en agua.
También puede referirse al proceso de extracción y aislamiento de fenoles de materias primas como el alquitrán de hulla . Estos fenoles purificados se utilizan en muchos compuestos industriales y médicos y se utilizan como precursores en algunas reacciones de síntesis .
La extracción con fenol es una técnica ampliamente utilizada para purificar muestras de ácido nucleico a partir de lisados celulares . [1] Para obtener ácidos nucleicos , la célula debe lisarse y los ácidos nucleicos deben separarse de otros componentes celulares.
El fenol es una sustancia polar con una densidad superior a la del agua (1,07 g/cm 3 [2] frente a los 1,00 g/cm 3 del agua ). Cuando se suspenden en una solución de agua y fenol, las proteínas desnaturalizadas y los componentes celulares no deseados se disuelven en el fenol, mientras que los ácidos nucleicos polares se disuelven en la fase acuosa. [3] La solución luego se puede centrifugar para separar el fenol y el agua en fases orgánicas y acuosas distintas . Los ácidos nucleicos purificados pueden precipitarse a partir de la fase acuosa de la solución.
El fenol se utiliza a menudo en combinación con cloroformo . [4] La adición de un volumen igual de cloroformo y fenol garantiza una separación distinta entre las fases acuosa y orgánica. El cloroformo y el fenol son miscibles y crean una solución más densa que el fenol solo, lo que ayuda a la separación de las capas orgánica y acuosa. Esta adición de cloroformo es útil cuando se elimina la fase acuosa para obtener una muestra de ácido nucleico purificada.
El pH de la solución debe ajustarse específicamente para cada tipo de extracción. Para la extracción de ADN , el pH se ajusta a 7,0–8,0. Para la extracción específica de ARN , el pH se ajusta a 4,5. A un pH de 4,5, los iones de hidrógeno neutralizan las cargas negativas de los grupos fosfato , lo que hace que el ADN se disuelva en la fase orgánica y permite aislar el ARN por separado en la fase acuosa.