La nefelometría es una técnica utilizada en inmunología para determinar los niveles de varias proteínas del plasma sanguíneo. Por ejemplo, los niveles totales de isotipos o clases de anticuerpos : Inmunoglobulina M , Inmunoglobulina G e Inmunoglobulina A. [ 1] Es importante en la cuantificación de cadenas ligeras libres en enfermedades como el mieloma múltiple . La cuantificación es importante para la clasificación de la enfermedad y para el seguimiento de la enfermedad una vez que un paciente ha sido tratado (un mayor sesgo de la relación entre las cadenas ligeras kappa y lambda después de que un paciente haya sido tratado es una indicación de recurrencia de la enfermedad).
Se realiza midiendo la luz dispersa en un ángulo desde la muestra que se está midiendo. [2] En la nefelometría diagnóstica, la rama ascendente de la curva de Heidelberger-Kendall se extiende optimizando el curso de la reacción de modo que la mayoría de las señales de medición de las proteínas plasmáticas (de sangre humana) caigan en el lado izquierdo de la curva de Heidelberger-Kendall, incluso en concentraciones muy altas. [ cita requerida ]
Esta técnica se utiliza ampliamente en los laboratorios clínicos porque es relativamente fácil de automatizar. Se basa en el principio de que una suspensión diluida de partículas pequeñas dispersará la luz (normalmente un láser) que pasa a través de ella en lugar de simplemente absorberla. La cantidad de dispersión se determina recogiendo la luz en un ángulo (normalmente a 30 y 90 grados). [3]
El anticuerpo y el antígeno se mezclan en concentraciones tales que solo se forman pequeños agregados que no se depositan rápidamente en el fondo. La cantidad de dispersión de luz se mide y se compara con la cantidad de dispersión de mezclas conocidas. La cantidad de la sustancia desconocida se determina a partir de una curva estándar.
La nefelometría se puede utilizar para detectar antígenos o anticuerpos, pero generalmente se realiza con el anticuerpo como reactivo y el antígeno del paciente como el desconocido. [4] En el laboratorio médico de inmunología, se pueden realizar dos tipos de pruebas: "nefelometría de punto final" y "nefelometría cinética (de velocidad)".
Las pruebas de nefelometría de punto final se realizan dejando que la reacción anticuerpo/antígeno se complete (hasta que todos los anticuerpos reactivos presentes y los antígenos de la muestra del paciente actual que pueden agregarse lo hayan hecho y no se puedan formar más complejos). Sin embargo, las partículas grandes caerán de la solución y causarán una lectura de dispersión falsa, por lo que se ideó la nefelometría cinética.
En la nefelometría cinética, la tasa de dispersión se mide inmediatamente después de añadir el reactivo. Mientras el reactivo sea constante, la tasa de cambio puede considerarse directamente relacionada con la cantidad de antígeno presente.
Además de las aplicaciones médicas, la nefelometría se puede utilizar para medir la claridad del agua, [5] para medir el crecimiento de microorganismos [6] [7] y para probar la solubilidad de los fármacos. [3]