En microbiología , la técnica de estrías se utiliza para aislar una cepa pura de una única especie de microorganismo, a menudo una bacteria . A continuación, se pueden tomar muestras de las colonias resultantes y se puede realizar un cultivo microbiológico en una nueva placa para poder identificar, estudiar o analizar el organismo.
El método moderno de cultivo en placa es el resultado de los esfuerzos de Robert Koch y otros microbiólogos por obtener cultivos microbiológicos de bacterias para estudiarlas. El método de dilución o aislamiento por cultivo en placa fue desarrollado por primera vez en el laboratorio de Koch por sus dos ayudantes Friedrick Loeffler y Georg Theodor August Gaffky . Este método implica la dilución de bacterias mediante el cultivo sistemático de las mismas sobre el exterior del agar en una placa de Petri para obtener colonias aisladas que luego crecerán hasta convertirse en una cantidad de células o colonias aisladas. Si en la superficie del agar crecen microorganismos que son todos genéticamente iguales, el cultivo se considera entonces como un cultivo microbiológico .
El estriado es un proceso rápido e idealmente simple de dilución de aislamiento. La técnica se realiza diluyendo una concentración comparativamente grande de bacterias a una concentración más pequeña. La disminución de bacterias debe mostrar que las colonias están lo suficientemente separadas como para afectar la separación de los diferentes tipos de microbios . El estriado se realiza utilizando una herramienta estéril , como un hisopo de algodón o comúnmente un asa de inoculación . Se utilizan técnicas asépticas para mantener los cultivos microbiológicos y evitar la contaminación del medio de crecimiento . Hay muchos tipos diferentes de métodos que se utilizan para estriar una placa. Elegir una técnica es una cuestión de preferencia individual y también puede depender de qué tan grande sea la cantidad de microbios que contiene la muestra.
El patrón de estrías en tres fases, conocido como T-Streak, se recomienda para principiantes. Las estrías se realizan utilizando una herramienta estéril , como un hisopo de algodón o, comúnmente, un asa de inoculación . El asa de inoculación se esteriliza primero pasándola por una llama. Cuando el asa se enfría, se sumerge en un inóculo, como un caldo o una muestra de paciente que contenga muchas especies de bacterias. Luego, el asa de inoculación se arrastra por la superficie del agar de un lado a otro en un movimiento de zigzag hasta que se haya cubierto aproximadamente el 30% de la placa. Luego, el asa se vuelve a esterilizar y la placa se gira 90 grados. Comenzando en la sección previamente estriada, el asa se arrastra a través de ella dos o tres veces continuando el patrón de zigzag. Luego, el procedimiento se repite una vez más teniendo cuidado de no tocar los sectores previamente estriados. Cada vez, el asa recoge cada vez menos bacterias hasta que reúne solo células bacterianas individuales que pueden crecer hasta formar una colonia. La placa debe mostrar el crecimiento más intenso en la primera sección. La segunda sección tendrá menos crecimiento y algunas colonias aisladas, mientras que la sección final tendrá la menor cantidad de crecimiento y muchas colonias aisladas.
La muestra se extiende a lo largo de un cuadrante de una placa de Petri que contiene un medio de crecimiento . Las bacterias necesitan diferentes nutrientes para crecer. Esto incluye agua, una fuente de energía, fuentes de carbono, azufre, nitrógeno, fósforo, ciertos minerales y otras vitaminas y factores de crecimiento. Un tipo muy común de medio utilizado en los laboratorios de microbiología se conoce como agar , una sustancia gelatinosa derivada de las algas marinas. El agar nutritivo tiene muchos ingredientes con cantidades desconocidas de nutrientes en ellos. Por un lado, este puede ser un medio muy selectivo para usar porque, como se mencionó, las bacterias son particulares. Si hay un cierto nutriente en el medio, las bacterias seguramente no podrían crecer y podrían morir . Por otro lado, este medio es muy complejo. Los medios complejos son importantes porque permiten una amplia gama de crecimiento microbiano. El crecimiento de las bacterias puede ser apoyado por este medio en gran medida debido en parte a las altas cantidades de nutrientes. La elección del medio de crecimiento que se utiliza depende del microorganismo que se está cultivando o seleccionando.
Dependiendo de la cepa, la placa puede luego incubarse , generalmente durante 24 a 36 horas, para permitir que las bacterias se reproduzcan. Al final de la incubación, debe haber suficientes bacterias para formar colonias visibles en las áreas tocadas por el asa de inoculación. A partir de estas colonias mixtas, se pueden identificar especies bacterianas o fúngicas individuales en función de sus diferencias morfológicas (tamaño/forma/color) y luego subcultivarlas en una nueva placa de medio para obtener un cultivo puro para su posterior análisis.
A nivel industrial se utilizan equipos automatizados para realizar el estriado de los medios sólidos con el fin de lograr una mejor esterilización y uniformidad del estriado y un trabajo más rápido y fiable. Al estriar manualmente es importante evitar rayar el medio sólido, ya que las líneas de estriado posteriores se dañarán y la deposición no uniforme del inóculo en los sitios dañados del medio produce un crecimiento agrupado de microbios que puede extenderse a las líneas de estriado cercanas.
Las bacterias existen en el agua, el suelo y los alimentos, en la piel y en la flora normal del tracto intestinal . La variedad de microbios que existen en el medio ambiente y en el cuerpo humano es enorme. El cuerpo humano tiene miles de millones de bacterias que crean la flora normal que lucha contra los patógenos invasores. Las bacterias se presentan con frecuencia en poblaciones mixtas. Es muy raro encontrar una sola especie de bacteria. Para poder estudiar las características culturales, morfológicas y fisiológicas de una especie individual, es vital que la bacteria se separe de las otras especies que generalmente se originan en el medio ambiente. Esto es importante para determinar una bacteria en una muestra clínica. Cuando la bacteria se extiende y se aísla, se puede identificar el agente causante de una enfermedad bacteriana.