La prueba de sangre seca (DBS, por sus siglas en inglés) es una forma de biomuestreo en la que las muestras de sangre se secan sobre papel de filtro. Las muestras secas se pueden enviar fácilmente a un laboratorio analítico y analizar mediante diversos métodos, como la amplificación de ADN o la cromatografía líquida de alto rendimiento . [ cita requerida ]
Ivar Bang describió por primera vez la muestra de sangre seca como un método de muestreo inusual en 1913. [1] El concepto de que la sangre capilar, obtenida al pinchar el talón o el dedo y secada sobre papel de filtro, podría usarse para detectar enfermedades metabólicas en grandes poblaciones de neonatos fue introducido en Escocia por Robert Guthrie en 1963. El cribado neonatal de la fenilcetonuria se generalizó en todo el país en 1969-70. Desde entonces, se han recolectado muestras de tarjetas de Guthrie de forma rutinaria de bebés en más de 20 países para detectar la fenilcetonuria y, más recientemente, el hipotiroidismo congénito , los trastornos de células falciformes y la infección por VIH. Las limitaciones de la sensibilidad y la especificidad al cribar volúmenes de sangre tan pequeños restringieron el uso de gotas de sangre seca durante muchos años. Sin embargo, los avances recientes, como la producción de anticuerpos monoclonales , la expresión de proteínas sintéticas y la introducción de la reacción en cadena de la polimerasa, han superado muchos de estos problemas. [2]
Este tipo de análisis de sangre ya está disponible para que lo utilicen los consumidores en sus hogares en los EE. UU. Los análisis de sangre disponibles incluyen vitamina D, estrógeno, testosterona, cortisol, TSH y lípidos. Nueva York es el único estado que prohíbe los análisis de sangre caseros. [ cita requerida ]
En 2001, se habían medido más de 175 analitos mediante DBS, desde acilcarnitinas y proteína C reactiva hasta ciclosporina A, citocinas, virus de la hepatitis B, glucosa y anticuerpos para más de 30 virus y microorganismos. También se midieron otros analitos, como gentamicina, lipoproteínas, prolactina, selenio, oligoelementos, vitamina A y protoporfirina de zinc. [3] [4]
En el siglo XX ya se había descrito el uso de sangre y suero extraídos y secados en papel de filtro para la realización de pruebas serológicas de sífilis. Se describieron recolecciones de muestras tanto de campo como de hogares. [3]
El primer informe sobre sangre absorbida en papel de filtro para mediciones de enzimas se publicó en 1953. [3] [5]
En 1962, Berry exploró el uso de muestras de orina de papel de filtro para programas de detección basados en la población. [3] [6]
En 1980 se introdujo una prueba inmunoquímica para la detección del cáncer colorrectal que utilizaba frotis de sangre oculta en heces sobre papel de filtro especialmente tratado. [3] [7]
En 1987, McCabe informó por primera vez sobre la extracción exitosa de ADN de sangre recolectada en papel secante y secada. [3] [8]
Las muestras de sangre seca se recogen aplicando unas gotas de sangre, extraídas con una lanceta del dedo del pie, del talón o de la mano, sobre un papel de filtro absorbente especialmente fabricado. Se deja que la sangre sature completamente el papel. Se deja secar al aire durante varias horas. [9] Las muestras se almacenan en bolsas de plástico de baja permeabilidad a los gases con desecante añadido para reducir la humedad, y se pueden conservar a temperatura ambiente, incluso en climas tropicales. [ cita requerida ]
Una vez en el laboratorio, los técnicos separan un pequeño disco de papel saturado de la hoja utilizando un perforador automático o manual, y dejan caer el disco en una placa de microtitulación de fondo plano. La sangre se eluye en solución salina tamponada con fosfato que contiene 0,05 % de Tween 80 y 0,005 % de azida sódica , durante la noche a 4 °C. La placa resultante que contiene los eluidos forma la "placa maestra" a partir de la cual se pueden realizar diluciones para pruebas posteriores. [2]
Como alternativa a la perforación de un disco de papel, las soluciones de automatización recientes extraen la muestra haciendo pasar un eluyente a través del filtro sin perforarlo. [10] [11] La empresa suiza CAMAG desarrolló una automatización que incluye la aplicación de un estándar interno antes de la extracción. [12]
La tecnología es prometedora para ampliar los servicios de diagnóstico a los bebés infectados por el VIH en entornos de escasos recursos debido a la mayor vida útil de las muestras con una menor necesidad de refrigeración y la naturaleza menos invasiva de la prueba en comparación con otros métodos. A diferencia de las pruebas ELISA para anticuerpos del VIH en la sangre, que pueden transmitirse a los bebés durante el embarazo independientemente del virus en sí, las pruebas de gotas de sangre seca se pueden utilizar para detectar el material genético del virus real, evitando así la probabilidad de un resultado falso positivo . Las pruebas de gotas de sangre seca para el VIH no se consideran lo suficientemente sensibles para las pruebas de diagnóstico, pero pueden ser útiles para estimar la prevalencia del VIH a través de la vigilancia. Las muestras de DBS también plantean un menor riesgo biológico para los manipuladores y son más fáciles de transportar o almacenar que las muestras de sangre líquida. [13]
La razón de la estabilidad del ADN, ARN o proteína podría atribuirse al hecho de que el material biológico se une a la matriz del papel de filtro y el proceso de secado excluye el agua, que es un factor importante necesario para que actúen las proteasas o nucleasas. La unión del material biológico también une varios inhibidores que pueden interferir con varios métodos de amplificación de ácidos nucleicos. [ cita requerida ]
La sangre seca tiene características importantes que la hacen adecuada para aplicaciones actuales y futuras. Presenta un riesgo potencial mínimo de contaminación bacteriana y/o hemólisis. Es un método de recolección fácil, no invasivo y económico. Las muestras de sangre seca se pueden almacenar durante períodos prolongados sin que se deterioren casi los analitos y requieren menos sangre en comparación con la venopunción convencional. [14]
Sin embargo, existen algunas preocupaciones asociadas con el biomuestreo de DBS, entre ellas, desafíos relacionados con el volumen de la muestra, la recuperación del analito, el efecto del hematocrito, la homogeneidad de la muestra y las características del papel de filtro utilizado. [3]