stringtranslate.com

TCEP

El TCEP ( tris(2-carboxietil)fosfina ) es un agente reductor que se utiliza con frecuencia en aplicaciones de bioquímica y biología molecular . A menudo se prepara y se utiliza como sal de clorhidrato (TCEP-HCl) con un peso molecular de 286,65 gramos/mol. Es soluble en agua y está disponible como una solución estabilizada a pH neutro e inmovilizada sobre un soporte de agarosa para facilitar la eliminación del agente reductor.

Síntesis

El TCEP se puede preparar mediante la hidrólisis ácida de tris(cianoetil)fosfina . [1]

Aplicaciones

El TCEP se utiliza a menudo como agente reductor para romper enlaces disulfuro dentro y entre proteínas como paso preparatorio para la electroforesis en gel .

En comparación con los otros dos agentes más comunes utilizados para este propósito ( ditiotreitol y β-mercaptoetanol ), el TCEP tiene las ventajas de ser inodoro, un agente reductor más potente, un agente reductor irreversible (en el sentido de que el TCEP no se regenera; el producto final de la escisión de disulfuro mediada por TCEP es de hecho dos tioles/cisteínas libres), más hidrófilo y más resistente a la oxidación en el aire. [2] Tampoco reduce los metales utilizados en la cromatografía de afinidad de metales inmovilizados .

El TCEP es particularmente útil al marcar residuos de cisteína con maleimidas . El TCEP puede evitar que las cisteínas formen enlaces disulfuro y, a diferencia del ditiotreitol y el β-mercaptoetanol , no reaccionará tan fácilmente con la maleimida. [2] Sin embargo, se ha informado que el TCEP reacciona con la maleimida en ciertas condiciones. [3] [4]

El TCEP también se utiliza en el proceso de homogeneización de tejidos para el aislamiento de ARN. [5]

Para aplicaciones de espectroscopia ultravioleta-visible , el TCEP es útil cuando es importante evitar interferencias en la absorbancia de 250 a 285 nanómetros que pueden ocurrir con el ditiotreitol . El ditiotreitol absorberá lentamente, con el tiempo, cada vez más luz en este espectro a medida que ocurren diversas reacciones redox.

Historia

Durante décadas, la reducción de biomoléculas con trialquifosfinas recibió poca atención debido a que las fosfinas disponibles históricamente eran extremadamente malolientes y/o insolubles en agua. [6] En 1969, se informó que el TCEP era una trialquifosfina inodora y soluble en agua adecuada para uso bioquímico, [7] sin embargo, el uso potencial del TCEP para aplicaciones bioquímicas fue casi totalmente ignorado durante décadas. En 1991, Burns informó sobre un nuevo procedimiento sintético conveniente para el TCEP, [8] lo que hizo que el TCEP se volviera más ampliamente disponible y comercializado como un "nuevo" agente reductor para uso bioquímico, y así el TCEP comenzó a usarse más ampliamente a lo largo de la década de 1990. [6]

Reacciones

TCEPT reducirá disulfuros a tioles en presencia de agua:

Reacción de TCEP que muestra que reduce un enlace disulfuro

A través de un proceso similar también puede reducir sulfóxidos y N-óxidos . [9] También se han informado otras reacciones secundarias:

Uso en investigación biológica

El TCEP está disponible en forma de sal de clorhidrato a través de varios proveedores de productos químicos. Cuando se disuelve en agua, el TCEP-HCl es ácido. Una preparación descrita es una solución madre acuosa de TCEP-HCl 0,5 M cuyo pH se ajusta a un pH casi neutro y se almacena congelada a -20 ˚C. [12] Se dice que el TCEP es menos estable en tampones de fosfato. [12]

Véase también

Referencias

  1. ^ Yost JM, Knight JD, Coltart DM (15 de septiembre de 2008). "Clorhidrato de tris(2-carboxietil)fosfina". Enciclopedia de reactivos para síntesis orgánica . doi :10.1002/047084289X.rn00973.
  2. ^ Información técnica del TCEP, de Interchim
  3. ^ Shafer, DE, Inman, JK, Lees, A. (2002). "Reacción de tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP) con maleimida y grupos α-haloacilo: elución anómala de TCEP por filtración en gel". Anal. Biochem . 282 (1): 161–164. doi :10.1006/abio.2000.4609. PMID  10860517. S2CID  37825047.
  4. ^ Tyagarajan K, Pretzer E, Wiktorowicz JE (2003). "Tintes reactivos al tiol para el etiquetado de fluorescencia de muestras proteómicas". Electroforesis . 24 (14): 2348–2358. doi :10.1002/elps.200305478. PMID  12874870. S2CID  20446141.
  5. ^ Rhee SS, Burke DH (2004). "Estabilización del ARN con tris(2-carboxietil)fosfina: comparación con ditiotreitol para su uso con la química de ácidos nucleicos y tiofosforilo". Anal. Biochem . 325 (1): 137–143. doi :10.1016/j.ab.2003.10.019. PMID  14715294.
  6. ^ ab Han J, Han G (1994). "Un procedimiento para la determinación cuantitativa de tris(2-carboxietil)fosfina, un agente reductor inodoro más estable y eficaz que el ditiotreitol". Analytical Biochemistry . 220 (1). Elsevier BV: 5–10. doi :10.1006/abio.1994.1290. ISSN  0003-2697. PMID  7978256.
  7. ^ Levison ME, Josephson AS, Kirschenbaum DM (1969). "Reducción de sustancias biológicas por fosfinas solubles en agua: gammaglobulina (IgG)". Experientia . 25 (2). Springer Science and Business Media LLC: 126–127. doi :10.1007/bf01899076. ISSN  0014-4754. PMID  4182166. S2CID  20548859.
  8. ^ Burns JA, Butler JC, Moran J, Whitesides GM (1991). "Reducción selectiva de disulfuros por tris(2-carboxietil)fosfina". The Journal of Organic Chemistry . 56 (8). Sociedad Química Estadounidense (ACS): 2648–2650. doi :10.1021/jo00008a014. ISSN  0022-3263.
  9. ^ Faucher AM, Grand-Maître C (octubre de 2003). "Tris (2-carboxietil)fosfina (TCEP) para la reducción de sulfóxidos, cloruros de sulfonilo, N-óxidos y azidas". Synthetic Communications . 33 (20): 3503–3511. doi :10.1081/SCC-120024730.
  10. ^ Wang Z, Rejtar T, Zhou ZS, Karger BL (4 de enero de 2010). "Desulfuración de péptidos que contienen cisteína resultantes de la preparación de muestras para la caracterización de proteínas mediante espectrometría de masas". Comunicaciones rápidas en espectrometría de masas . 24 (3). Wiley: 267–275. doi :10.1002/rcm.4383. ISSN  0951-4198. PMC 2908508 . PMID  20049891. 
  11. ^ Liu P, O'Mara BW, Warrack BM, Wu W, Huang Y, Zhang Y, Zhao R, Lin M, Ackerman MS, Hocknell PK, Chen G, Tao L, Rieble S, Wang J, Wang-Iverson DB, Tymiak AA, Grace MJ, Russell RJ (28 de enero de 2010). "Escisión relacionada con tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP) en proteínas que contienen cisteína". Revista de la Sociedad Americana de Espectrometría de Masas . 21 (5). Sociedad Química Americana (ACS): 837–844. doi : 10.1016/j.jasms.2010.01.016 . ISSN  1044-0305. PMID  20189823.
  12. ^ ab "Estrategias para la purificación de proteínas". Cytiva . Consultado el 24 de febrero de 2023 .