La precipitación inducida por sal (también conocida como precipitación inducida por sal , fraccionamiento de sal , cristalización antidisolvente , cristalización por precipitación o ahogamiento ) [1] es una técnica de purificación que utiliza la solubilidad reducida de ciertas moléculas en una solución de fuerza iónica muy alta . La precipitación por sal se utiliza normalmente para precipitar biomoléculas grandes, como proteínas o ADN. [2] Debido a que la concentración de sal necesaria para que una proteína determinada precipite de la solución difiere de una proteína a otra, se puede utilizar una concentración de sal específica para precipitar una proteína objetivo. Este proceso también se utiliza para concentrar soluciones diluidas de proteínas. Se puede utilizar diálisis para eliminar la sal si es necesario.
Los compuestos de sal se disocian en soluciones acuosas. Esta propiedad se aprovecha en el proceso de desoxidación. Cuando aumenta la concentración de sal, algunas de las moléculas de agua son atraídas por los iones de sal , lo que disminuye la cantidad de moléculas de agua disponibles para interactuar con la parte cargada de la proteína. [3]
En las moléculas de proteínas hay aminoácidos hidrófobos y aminoácidos hidrófilos . Después del plegamiento de las proteínas en solución acuosa, los aminoácidos hidrófobos suelen formar áreas hidrófobas protegidas, mientras que los aminoácidos hidrófilos interactúan con las moléculas de solvatación y permiten que las proteínas formen enlaces de hidrógeno con las moléculas de agua circundantes. Si una parte suficiente de la superficie de la proteína es hidrófila, la proteína puede disolverse en agua. [4]
Cuando se añade sal a la solución, hay una interacción más frecuente entre las moléculas de disolvente y los iones de sal. Como resultado, la proteína y los iones de sal compiten para interactuar con las moléculas de disolvente, con el resultado de que hay menos moléculas de disolvente disponibles para la interacción con las moléculas de proteína que antes. Las interacciones proteína-proteína se vuelven así más fuertes que las interacciones disolvente-soluto y las moléculas de proteína se asocian formando interacciones hidrofóbicas entre sí. [5] Después de la disociación en un disolvente determinado, los átomos cargados negativamente de una sal elegida comienzan a competir por interacciones con las moléculas cargadas positivamente presentes en la solución. De manera similar, los cationes cargados positivamente compiten por interacciones con las moléculas cargadas negativamente del disolvente. Este proceso se conoce como precipitación de sal. [ cita requerida ]
Los jabones se precipitan fácilmente con una solución de sal concentrada; el ion metálico de la sal reacciona con los ácidos grasos y forma nuevamente el jabón y la glicerina (glicerol). Para separar la glicerina del jabón, la masa pastosa en ebullición se trata con salmuera (solución de NaCl). El contenido de la olla se separa en una capa superior que es una masa cuajada de jabón impuro y una capa inferior que consiste en una solución de sal acuosa con la glicerina disuelta en ella. La solución de sal ligeramente alcalina, denominada lejía usada, se extrae del fondo de la olla o la olla y puede tratarse posteriormente para recuperar la glicerina. [ cita requerida ]
Como las diferentes proteínas tienen diferentes composiciones de aminoácidos, diferentes moléculas de proteína precipitan en diferentes concentraciones de solución salina. [ cita requerida ]
Las proteínas no deseadas se pueden eliminar de una mezcla de solución de proteínas mediante la salificación, siempre que se conozca la solubilidad de la proteína en varias concentraciones de solución salina. Después de eliminar el precipitado mediante filtración o centrifugación , la proteína deseada se puede precipitar modificando la concentración de sal al nivel en el que la proteína deseada se vuelve insoluble. [6]
Una desventaja de la precipitación con sal en la purificación de proteínas es que, además de precipitar una proteína de interés específica, también se precipitan contaminantes. Por lo tanto, para obtener una proteína de interés más pura, pueden requerirse métodos de purificación adicionales, como la cromatografía de intercambio iónico. [7]