Una prueba de micronúcleos es una prueba utilizada en la detección toxicológica de posibles compuestos genotóxicos . El ensayo ahora se reconoce como uno de los más exitosos y confiables para carcinógenos genotóxicos , es decir, carcinógenos que actúan causando daño genético y está recomendado por las directrices de la OCDE para las pruebas de sustancias químicas. [1] Hay dos versiones principales de esta prueba, una in vivo y otra in vitro .
La prueba in vivo normalmente utiliza médula ósea de ratón o sangre periférica de ratón. Cuando un eritroblasto de médula ósea se desarrolla hasta convertirse en un eritrocito policromático , el núcleo principal se extruye; cualquier micronúcleo que se haya formado puede permanecer en el citoplasma que de otro modo estaría anucleado . La visualización de los micronúcleos se facilita en estas células porque carecen de un núcleo principal . Un aumento en la frecuencia de eritrocitos policromáticos micronucleados en animales tratados es una indicación de daño cromosómico inducido. [2]
Los micronúcleos fueron utilizados por primera vez para cuantificar el daño cromosómico por HJ Evans et al., en las puntas de las raíces de la haba , Vicia faba . Posteriormente, W. Schmid y JA Heddle y sus colegas desarrollaron de forma independiente el ensayo in vivo . El ensayo de sangre periférica de ratón fue desarrollado por JT MacGregor y ahora A. Tometsko y sus colegas lo han adaptado para su medición mediante citometría de flujo . El primer uso de micronúcleos en células cultivadas fue por JA Heddle y sus colegas en linfocitos humanos . M. Fenech y sus colegas han mejorado el ensayo para su uso en linfocitos y otras células en cultivos celulares .
La tinción de Giemsa simple se utilizó originalmente para la puntuación de MN. Posteriormente, se estableció el método del micronúcleo de bloqueo de citocinesis (CBMN), en el que se utilizó Cyt-B , un inhibidor del ensamblaje del huso, para prevenir la citocinesis que se producía después de la división nuclear. El método CBMN se utiliza para la evaluación de la pérdida, rotura y apoptosis y necrosis cromosómicas asociadas inducidas por diferentes mutágenos . [3]
Un micronúcleo es el (tercer) núcleo errático que se forma durante la anafase de la mitosis o meiosis . Los micronúcleos (el nombre significa "núcleo pequeño") son cuerpos citoplasmáticos que tienen una porción de cromosoma acéntrico o un cromosoma completo que no fue transportado a los polos opuestos durante la anafase. Su formación da como resultado que la célula hija carezca de una parte o de la totalidad de un cromosoma. Estos fragmentos de cromosomas o cromosomas completos normalmente desarrollan membranas nucleares y forman micronúcleos como un tercer núcleo. Después de la citocinesis, una célula hija termina con un núcleo y la otra termina con un núcleo grande y otro pequeño, es decir, micronúcleos. Existe la posibilidad de que se forme más de un micronúcleo cuando se ha producido más daño genético. La prueba de micronúcleos se utiliza como herramienta para la evaluación de la genotoxicidad de diversas sustancias químicas. Es más fácil de realizar que la prueba de aberración cromosómica en términos de procedimientos y evaluación. Usando hibridación fluorescente in situ (FISH) con sondas dirigidas a la región del centrómero , se puede determinar si se pierde un cromosoma completo o solo un fragmento.