La proteína de replicación A ( RPA ) es la principal proteína que se une al ADN monocatenario (ssDNA) en las células eucariotas . [1] [2] In vitro , la RPA muestra una afinidad mucho mayor por el ssDNA que el ARN o el ADN bicatenario. [3] La RPA es necesaria en los procesos de replicación , recombinación y reparación, como la reparación por escisión de nucleótidos y la recombinación homóloga . [2] [4] También desempeña funciones en la respuesta al ADN dañado. [4]
RPA es un heterotrímero , compuesto por las subunidades RPA1 (RPA70) (subunidad de 70 kDa), RPA2 (RPA32) (subunidad de 32 kDa) y RPA3 (RPA14) (subunidad de 14 kDa). Las tres subunidades de RPA contienen seis pliegues OB (unión de oligonucleótidos/oligosacáridos) , con dominios de unión al ADN (DBD) denominados DBD AF, que unen RPA al ADN monocatenario . [2] [3]
Los DBD A, B, C y F se encuentran en RPA1, el DBD D se encuentra en RPA2 y el DBD E se encuentra en RPA3. [4] Los DBD C, D y E forman el núcleo de trimerización de la proteína con regiones de enlace flexibles que los conectan entre sí. [4] Debido a estas regiones de enlace flexibles, se considera que RPA es altamente flexible y esto respalda la unión dinámica que RPA puede lograr. Debido a esta unión dinámica, RPA también es capaz de diferentes conformaciones que conducen a una variedad de números de nucleótidos con los que puede unirse. [4]
Los DBD A, B, C y D son los sitios que participan en la unión del ssDNA. [5] Las interacciones proteína-proteína entre RPA y otras proteínas ocurren en el extremo N-terminal de RPA1, específicamente DBD F, junto con el extremo C-terminal de RPA2. [5] La fosforilación de RPA tiene lugar en el extremo N-terminal de RPA2. [5]
El RPA comparte muchas características con el heterotrímero complejo CST , aunque el RPA tiene una estequiometría más uniforme 1:1:1 . [6]
Durante la replicación del ADN, la RPA evita que el ADN monocatenario (ssDNA) se enrolle sobre sí mismo o forme estructuras secundarias. También ayuda a proteger el ssDNA de ser atacado por endonucleasas . [2] Esto mantiene el ADN desenrollado para que la polimerasa lo replique. La RPA también se une al ssDNA durante la fase inicial de la recombinación homóloga, un proceso importante en la reparación del ADN y la profase I de la meiosis .
La hipersensibilidad a los agentes que dañan el ADN puede ser causada por mutaciones en el gen RPA. [7] Al igual que su papel en la replicación del ADN, esto evita que el ssADN se una a sí mismo (autocomplementación) de modo que el filamento de nucleoproteína resultante pueda luego ser unido por Rad51 y sus cofactores. [7]
La RPA también se une al ADN durante el proceso de reparación por escisión de nucleótidos. Esta unión estabiliza el complejo de reparación durante el proceso de reparación. Un homólogo bacteriano se denomina proteína de unión a cadena sencilla (SSB).