Un ejemplo de micrografía de campo brillante . Esta imagen muestra una sección transversal del tejido vascular del tallo de una planta.
La microscopía de campo brillante ( BF ) es la más simple de todas las técnicas de iluminación de microscopía óptica . La iluminación de la muestra es luz blanca transmitida (es decir, iluminada desde abajo y observada desde arriba) , y el contraste en la muestra es causado por la atenuación de la luz transmitida en áreas densas de la muestra. La microscopía de campo brillante es la más simple de una variedad de técnicas utilizadas para la iluminación de muestras en microscopios ópticos, y su simplicidad la convierte en una técnica popular. La apariencia típica de una imagen de microscopía de campo brillante es una muestra oscura sobre un fondo brillante, de ahí el nombre.
Camino de luz
La trayectoria de la luz de un microscopio de campo brillante es extremadamente simple; no se requieren componentes adicionales más allá de la configuración normal del microscopio óptico. Por tanto, el camino de la luz consta de:
una fuente de luz de transiluminación, comúnmente una lámpara halógena en el soporte del microscopio;
una lente condensadora , que enfoca la luz de la fuente de luz sobre la muestra;
una lente objetivo , que recoge la luz de la muestra y magnifica la imagen;
La microscopía de campo brillante puede utilizar iluminación crítica o Köhler para iluminar la muestra.
Actuación
La microscopía de campo brillante suele tener poco contraste con la mayoría de las muestras biológicas, ya que pocas absorben la luz en gran medida. A menudo se requiere tinción para aumentar el contraste, lo que impide su uso en células vivas en muchas situaciones. La iluminación de campo brillante es útil para muestras que tienen un color intrínseco, por ejemplo, las mitocondrias que se encuentran en las células.
Comparación de técnicas de transiluminación utilizadas para generar contraste en una muestra de papel tisú (1,559 μm/píxel)
Iluminación de campo brillante, el contraste de la muestra proviene de la absorbancia de la luz en la muestra.
Simplicidad de configuración, ya que solo se requiere equipo básico.
Las células vivas se pueden ver con microscopios de campo brillante. [1]
Limitaciones
Muy bajo contraste de la mayoría de las muestras biológicas;
El límite práctico de aumento con un microscopio óptico es de alrededor de 1300X. Aunque son posibles aumentos mayores, resulta cada vez más difícil mantener la claridad de la imagen a medida que aumenta el aumento; [2]
Las muestras que son naturalmente incoloras y transparentes no se pueden ver bien, por ejemplo, muchos tipos de células de mamíferos. A menudo es necesario teñir estas muestras antes de verlas. Las muestras que tienen su propio color pueden verse sin preparación, por ejemplo, la observación del flujo citoplasmático en las células Chara .
Mejoras
Reducir o aumentar la cantidad de fuente de luz mediante el diafragma del iris .
Uso de una lente objetivo de inmersión en aceite y un aceite de inmersión especial colocado sobre una cubierta de vidrio sobre la muestra. El aceite de inmersión tiene la misma refracción que el vidrio y mejora la resolución de la muestra observada.
Empleo de métodos de tinción de muestras para uso en microbiología , como tinciones simples ( azul de metileno , safranina , violeta cristal ) y tinciones diferenciales (tinciones negativas, tinciones flagelares, tinciones de endosporas).
Uso de un filtro polarizador o de color (generalmente azul) en la fuente de luz para resaltar características que no son visibles con luz blanca. El uso de filtros es especialmente útil con muestras minerales .
Referencias
Microscopía óptica avanzada vol. 1 Principios y propiedades básicas de Maksymilian Pluta, Elsevier (1988)
Introducción a la microscopía óptica por S. Bradbury, B. Bracegirdle, BIOS Scientific Publishers (1998)
Microbiología: principios y exploraciones por Jacquelyn G. Black, John Wiley & Sons, Inc. (2005)
Literatura sobre microscopía e imágenes
Notas
^ Alberts, Bruce; et al. (2002). Biología molecular de la célula (4ª ed.). Nueva York: Garland Science. ISBN 0-8153-3218-1.
^ "Microscopía: tipos de microscopía" (PDF) . Colegio Comunitario de Hillsborough . Archivado desde el original (PDF) el 20 de abril de 2017 . Consultado el 19 de abril de 2017 .
