La agregometría de múltiples electrodos (MEA) es una prueba de la función plaquetaria en sangre completa . [1] [2] La prueba se puede utilizar para diagnosticar trastornos plaquetarios, [3] [4] [5] controlar la terapia antiplaquetaria, [6] y también se investiga como un posible predictor de los requisitos de transfusión y el riesgo de sangrado en la cirugía cardíaca. [7]
El analizador Multiplate MEA (Roche Diagnostics International Ltd) tiene 5 canales para la medición simultánea de varias muestras o agonistas . El instrumento detecta el cambio en la impedancia eléctrica cuando las plaquetas se agregan en electrodos metálicos en la cubeta de prueba . Cada cubeta contiene dos pares de electrodos sensores, cada uno de los cuales mide el cambio en la impedancia. Los sensores duplicados sirven como un control de calidad integrado y el análisis se acepta si el coeficiente de correlación de las mediciones es mayor que 0,98. También se calcula la diferencia de cada curva con respecto a la curva media y se acepta una diferencia inferior al 20%. Las cubetas de prueba también contienen una barra agitadora magnética revestida de teflón . El aumento de la impedancia a medida que se produce la agregación se transforma en unidades de agregación (UA) y se representa gráficamente en función del tiempo en la pantalla de la computadora.
El fabricante recomienda el uso de hirudina como anticoagulante para las muestras a analizar, pero los estudios han demostrado que la heparina es una buena alternativa. [8] [9] Se necesitan 300 μL de sangre para cada análisis, y se diluyen con la misma cantidad de solución salina . Después de pipetear la sangre y la solución salina en la cubeta, la prueba se incuba durante tres minutos antes de agregar el agonista elegido. Luego se inicia la prueba y se registra la agregación plaquetaria a intervalos de aproximadamente 0,5 segundos durante seis minutos. Se calculan tres parámetros: agregación , velocidad y área bajo la curva (AUC). La agregación (en AU) es la altura máxima de la curva de agregación y la velocidad (en AU/min) es la pendiente máxima de la curva. El AUC es el parámetro más importante . Se registra en Unidades (U) y se ve afectado tanto por la altura como por la pendiente de la curva de agregación, y es la mejor medida general de la actividad plaquetaria.
El difosfato de adenosina (ADP) es un agonista plaquetario. Cuando se añade a la sangre entera diluida en solución salina en la cubeta de prueba, estimula los receptores de ADP en las plaquetas, lo que las activa. La activación de las plaquetas conduce al cambio de forma y la desgranulación, y el contenido liberado de los gránulos activa aún más las plaquetas. La activación también induce un cambio conformacional en el receptor de la glucoproteína IIb/IIIa (GPIIb/IIIa), lo que le confiere una alta afinidad por el fibrinógeno . La unión del fibrinógeno a los receptores GPIIb/IIIa conduce a puentes plaqueta a plaqueta y da como resultado la agregación plaquetaria. Los fármacos antiplaquetarios como el clopidogrel y el prasugrel inhiben irreversiblemente el receptor de ADP P2Y12 , lo que conduce a una disminución de la agregación plaquetaria inducida por ADP. Los fármacos que inhiben el receptor GPIIb/IIIa, por ejemplo, eptifibatide , también pueden reducir o eliminar la respuesta plaquetaria inducida por ADP. [11]
En el ASPItest se añade ácido araquidónico a la muestra de sangre diluida en solución salina. El ácido araquidónico se convierte en prostaglandina H2 (PGH2) por acción de la ciclooxigenasa-1 (COX1), y luego la PGH2 se convierte en tromboxano A2 (TXA2) por acción de la tromboxano sintasa . El TXA2 aumenta la agregación plaquetaria, promueve la desgranulación y estimula la activación plaquetaria. La inhibición de la COX1, como ocurre con el ácido acetilsalicílico , y la inhibición o ausencia del receptor GPIIb/IIIa, como se observa en la trombastenia de Glanzmann , reducirán la agregación plaquetaria en respuesta al ácido araquidónico. [12]
Se añade colágeno a la mezcla de muestra y solución salina y se une a los receptores de colágeno de las plaquetas. Esto produce la liberación de ácido araquidónico, que se convierte en el potente activador plaquetario TXA2. COLtest es sensible a la inhibición de COX1 y GPIIb/IIIa y a la trombastenia de Glanzmann . [13]
La ristocetina forma complejos con el factor de von Willebrand (vWF) que se unen a los receptores de la glucoproteína Ib (GP1b) en las plaquetas, lo que provoca la activación y agregación plaquetaria. La agregación reducida o ausente en respuesta a la ristocetina puede ser causada por una falta o reducción de vWF, como se ve en la enfermedad de von Willebrand (vWD), o la ausencia o reducción en el número de receptores GP1b, como en el síndrome de Bernard-Soulier (BSS). RISTOtest se puede realizar en dos concentraciones: RISTOhigh y RISTOlow. En RISTOhigh, se aplica una concentración de ristocetina de 0,77 mg/mL. Esto normalmente induce una fuerte agregación plaquetaria, y la agregación baja o ausente puede ser causada por las condiciones mencionadas anteriormente vWD y BSS. [14] En RISTOlow, la concentración de ristocetina es de solo 0,2 mg/mL, y en un nivel que normalmente no induce una fuerte respuesta de agregación. Esta prueba puede detectar si el vWF muestra una tendencia más fuerte de lo normal a agregar plaquetas, lo que se puede observar en un subtipo de vWD llamado vWDIIb. [15]
El péptido activador del receptor de trombina 6 (TRAP-6) activa las plaquetas a través del receptor activado por la proteasa del receptor de trombina 1 (PAR-1). La unión de TRAP-6 a PAR-1 provoca un cambio conformacional en los receptores GPIIb/IIIa de las plaquetas, lo que les confiere una alta afinidad por el fibrinógeno. El fibrinógeno se une entonces a los receptores, lo que provoca la reticulación de varias plaquetas y la agregación. La agregación en TRAPtest puede estar reducida o ausente en la trombastenia de Glanzmann , donde los receptores GPIIb/IIIa son escasos o están ausentes, o si el paciente está tomando un antagonista de GPIIb/IIIa . Traptest tiene una sensibilidad menor para la inhibición de los receptores COX1 y ADP. [16]
La adición del reactivo ASA ( ácido acetilsalicílico ) a una muestra de sangre reduce las respuestas de agregación en ASPItest y COLtest. El ASA inhibe irreversiblemente la COX1 en las plaquetas, inhibiendo así la producción de TXA2. El reactivo ASA se utiliza como control de calidad en las pruebas de función plaquetaria con Multiplate, lo que permite la evaluación de respuestas plaquetarias anormales en ASPItest y COLtest. [17]
Este reactivo se utiliza como control de calidad en las pruebas de función plaquetaria Multiplate. El antagonista de GPIIb/IIIa bloquea la unión del fibrinógeno a los receptores de GPIIb/IIIa, lo que impide la formación de enlaces plaquetario-fibrinógeno y da como resultado una agregación plaquetaria significativamente reducida en respuesta a todos los agonistas. El reactivo antagonista se utiliza junto con la prueba TRAP y permite la evaluación de un control positivo. [18]
La prostaglandina E1 (PGE1) es un inhibidor plaquetario que provoca un aumento del monofosfato de adenosina cíclico (cAMP) en las plaquetas al estimular la actividad de la adenilil ciclasa . El cAMP es una molécula de señalización intracelular y el aumento de cAMP inhibe la movilización de calcio y la agregación plaquetaria inducida por la activación del receptor de ADP P2Y1. La activación del receptor P2Y1 inicia la agregación plaquetaria en respuesta al ADP. El receptor P2Y1 es necesario para la activación plaquetaria inducida por ADP, pero no es suficiente para una agregación plaquetaria completa en respuesta al ADP. [19] El cAMP inhibe la agregación plaquetaria y la disminución de las cantidades de cAMP en las plaquetas conduce a la agregación plaquetaria. [20] El reactivo PGE1 se utiliza junto con la prueba de ADP para dos propósitos: la evaluación de la alta sensibilidad (HS) del ADP y de los controles positivos de la prueba de ADP. Cuando se añade una pequeña cantidad de PGE1 (20 μL) al ADPtest, se induce una inhibición moderada de la agregación en muestras normales, pero aumenta en gran medida la sensibilidad de las plaquetas a la inhibición por clopidogrel. Por eso, la prueba modificada se denomina "alta sensibilidad". La adición de 50 μL de PGE1 al ADPtest produce una fuerte inhibición de la agregación inducida por ADP y se utiliza para la evaluación de controles positivos del ADPtest. [21]