El hemocitómetro (o hemocitómetro, o cámara de Burker) es un dispositivo de cámara de conteo originalmente diseñado y generalmente utilizado para contar células sanguíneas . [1]
El hemocitómetro fue inventado por Louis-Charles Malassez y consiste en un portaobjetos de vidrio grueso con una hendidura rectangular que crea una cámara de volumen de precisión. Esta cámara está grabada con una cuadrícula de líneas perpendiculares grabadas con láser. El dispositivo está cuidadosamente elaborado de modo que se conoce el área delimitada por las líneas, y también se conoce la profundidad de la cámara. Por lo tanto, al observar un área definida de la cuadrícula, es posible contar el número de células o partículas en un volumen específico de líquido y, de ese modo, calcular la concentración de células en el líquido en general. Un tipo de hemocitómetro muy utilizado es la cámara de recuento de Neubauer . [2]
Se utilizan otros tipos de hemocitómetros con diferentes calibraciones para diferentes aplicaciones. Las calibraciones Fuchs-Rosenthal, comúnmente utilizadas para el recuento de líquido cefalorraquídeo, las calibraciones Howard Mold utilizadas para el moho en alimentos y productos de envasado de alimentos , la calibración McMaster Egg Slide utilizada para contar huevos microbianos en material fecal, la calibración Nageotte Chamber para contar niveles bajos de glóbulos blancos en componentes plaquetarios reducidos en glóbulos blancos, la calibración Palmer Nanoplankton para contar planctones más pequeños. El contador Petroff-Hausser que utiliza calibraciones Neubauer mejoradas se utiliza para recuentos de bacterias o espermatozoides y se ofrece con diferentes profundidades de cámara. La calibración Sedgwick-Rafter Cell en un hemocitómetro está diseñada principalmente para su uso en la microscopía de agua potable.
El área cuadriculada del hemocitómetro de regla de Neubauer mejorado consta de nueve cuadrados de 1 x 1 mm (1 mm 2 ). Estos se subdividen en tres direcciones: 0,25 x 0,25 mm (0,0625 mm 2 ), 0,25 x 0,20 mm (0,05 mm 2 ) y 0,20 x 0,20 mm (0,04 mm 2 ). El cuadrado central se subdivide a su vez en cuadrados de 0,05 x 0,05 mm (0,0025 mm 2 ). Los bordes elevados del hemocitómetro mantienen el cubreobjetos a 0,1 mm de la cuadrícula marcada, lo que le da a cada cuadrado un volumen definido (ver figura a la derecha). [3]
Para utilizar el hemocitómetro, asegúrese primero de que el cubreobjetos especial que se proporciona con la cámara de recuento esté correctamente colocado sobre la superficie de la cámara de recuento. Cuando las dos superficies de vidrio están en contacto adecuado, se pueden observar los anillos de Newton . Si es así, la suspensión celular se aplica al borde del cubreobjetos para que sea succionada hacia el vacío por acción capilar , lo que llena completamente la cámara con la muestra. El número de células en la cámara se puede determinar mediante recuento directo utilizando un microscopio , y las células distinguibles visualmente se pueden contar de forma diferencial. El número de células en la cámara se utiliza para calcular la concentración o densidad de las células en la mezcla de la que proviene la muestra. Es el número de células en la cámara dividido por el volumen de la cámara, que se conoce desde el principio, teniendo en cuenta las diluciones y los atajos de recuento:
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donde el volumen de la muestra diluida (después de la dilución) dividido por el volumen de la mezcla original en la muestra (antes de la dilución) es el factor de dilución . Por ejemplo, si el volumen de la mezcla original era de 20 μL y se diluyó una vez (añadiendo 20 μL de diluyente), entonces el segundo término entre paréntesis es 40 μL/20 μL. El volumen de los cuadrados contados es el que se muestra en la tabla de la parte superior, dependiendo del tamaño (ver figura a la derecha). El número de células contadas es la suma de todas las células contadas en los cuadrados de una cámara. La proporción de células contadas se aplica si no se cuentan todos los cuadrados internos dentro de un cuadrado fijo (es decir, si solo se cuentan 4 de los 20 en un cuadrado de esquina, entonces este término será igual a 0,2). Al contar cuadrados grandes con un volumen de 100 nanolitros (nL), una multiplicación por 10000 conduce al recuento de células deseado por mililitro.
En la mayoría de las aplicaciones, solo se utilizan los cuatro cuadrados grandes de las esquinas. Se cuentan las celdas que están sobre las líneas superior e izquierda o que las tocan, pero se ignoran las que están sobre las líneas derecha o inferior o que las tocan. [5]
La suspensión original debe mezclarse completamente antes de tomar una muestra. Esto garantiza que la muestra sea representativa y no solo un artefacto de la región particular de la mezcla original de la que se extrajo.
Se debe utilizar una dilución adecuada de la mezcla en relación con el número de células que se van a contar. Si la muestra no está lo suficientemente diluida, las células estarán demasiado apiñadas y será difícil contarlas. Si está demasiado diluida, el tamaño de la muestra no será suficiente para hacer inferencias sólidas sobre la concentración en la mezcla original.
Al realizar una prueba redundante en una segunda cámara, se pueden comparar los resultados. Si difieren en más de 2 veces el error de conteo (raíz cuadrada del conteo [6] ), el método de toma de la muestra puede no ser confiable (por ejemplo, la mezcla original no está bien mezclada).
La cámara de recuento debe llenarse por capilaridad después de colocar la tapa (cubreobjetos especial con espesor y planitud certificados). Esto evita el riesgo de que las células se sedimenten o se adhieran al vidrio o de que se evapore una parte del volumen antes de colocar el cubreobjetos encima, lo que daría como resultado una sobrestimación de la concentración celular. La sedimentación es un problema menor con las bacterias, pero la evaporación, más frecuente en laboratorios con aire acondicionado y baja humedad, debe minimizarse.
