La 3,3′,5,5′-tetrametilbencidina o TMB es un sustrato cromogénico utilizado en procedimientos de tinción en inmunohistoquímica , además de ser un reactivo de visualización utilizado en ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas ( ELISA ). [1] La TMB es un sólido blanco que forma un líquido verde azulado pálido en solución con acetato de etilo . La TMB se degrada con la luz solar y con luces fluorescentes . Se utiliza para detectar hematuria, ya que se vuelve azul en contacto con la hemoglobina.
Muestra la oxidación de 3,3',5,5'-tetrametilbencidina (TMB) a 3,3',5,5'-tetrametilbencidina diimina
El producto de oxidación de un electrón resultante es un complejo diimina -diamina, que hace que la solución adquiera un color azul, [2] y este cambio de color se puede leer en un espectrofotómetro en las longitudes de onda de 370 y 650 nm.
La reacción se puede detener mediante la adición de ácido u otro reactivo de parada. El uso de ácido sulfúrico hace que el TMB se torne amarillo, con una absorbancia máxima de 450 nm. La cantidad de TMB convertido se puede indexar por la cantidad de luz de 450 nm que absorbe. [3]
Seguridad de los materiales
El TMB debe mantenerse alejado de la luz solar directa, ya que es fotosensible. No se sabe si el TMB es cancerígeno y la evidencia es contradictoria: el TMB no es mutagénico según la prueba de Ames , [4] [5] [6] [7] y no indujo la formación de tumores en un estudio de un solo brazo de 24 ratas. [4] Según esa evidencia, se ha utilizado como reemplazo de compuestos cancerígenos como la bencidina [8] y la o-fenilendiamina.
Referencias
^ Entrada del catálogo de Sigma Aldrich para 3,3′,5,5′-tetrametilbencidina
^ Zhang X; Yang Q; Lang Y; Jiang X; Wu P (2020). "Fundamento de la 3,3',5,5'-tetrametilbencidina como sustrato cromogénico en el análisis colorimétrico". Anal. Química . 92 (18): 12400–12406. doi :10.1021/acs.analchem.0c02149. PMID 32794705. S2CID 221132691.
^ "Solución de sustrato TMB".
^ ab Holland VR; Saunders BC; Rose FL; Walpole AL (1974). "Un sustituto más seguro de la bencidina en la detección de sangre". Tetrahedron . 30 (18): 3299. doi :10.1016/S0040-4020(01)97504-0.
^ Ashby J; Paton D; Lefevre PA; Styles JA; Rose FL (1982). "Evaluación de dos métodos sugeridos para desactivar carcinógenos orgánicos mediante modificación molecular". Carcinogénesis . 3 (11): 1277–1282. doi :10.1093/carcin/3.11.1277. PMID 6758975.
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^ Chung KT; Chen SC; Claxton LD (2006). "Revisión de la mutagenicidad de la bencidina, análogos de bencidina y colorantes basados en bencidina en Salmonella typhimurium". Mutation Research/Reviews in Mutation Research . 612 (1): 58–76. doi :10.1016/j.mrrev.2005.08.001. PMID 16198141.
^ Yang J; Wang H; Zhang H (2008). "Síntesis en un solo recipiente de nanoplacas de plata y nanofibras complejas de transferencia de carga". J Phys Chem C . 112 (34): 13065–13069. doi :10.1021/jp802604d.
