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Digoxigenina

La digoxigenina ( DIG ) es un esteroide que se encuentra exclusivamente en las flores y hojas de las plantas Digitalis purpurea , Digitalis orientalis y Digitalis lanata (dedaleras), donde se une a los azúcares para formar los glucósidos (por ejemplo, digoxina , lanatósido C ). [2]

Usos en biotecnología

La digoxigenina es un hapteno , una molécula pequeña con alta antigenicidad , que se utiliza en muchas aplicaciones de biología molecular de manera similar a otros haptenos populares como el 2,4-dinitrofenol , la biotina y la fluoresceína . Normalmente, la digoxigenina se introduce químicamente ( conjugación ) en biomoléculas (proteínas, ácidos nucleicos) para ser detectada en ensayos posteriores. La K d de la interacción digoxigenina-anticuerpo se ha estimado en ~12 nM [3] (comparada con K d ~0,1 pM para la interacción biotina-estreptavidina [4] ).

Proteínas de unión a DIG

Tinberg et al. diseñaron proteínas artificiales que se unen a DIG. Su mejor ligante, DIG10.3, era una proteína de 141 aminoácidos que se unía a DIG con una constante de disociación (K d ) de 541 (+/- 193) pM. [5]

Los anticuerpos anti-digoxigenina con alta afinidad y especificidad se utilizan en una variedad de inmunoensayos biológicos (por ejemplo, ELISA ). Los anticuerpos se marcan con colorantes, enzimas o fluorescencia, directa o secundariamente, para su visualización y detección.

La digoxigenina es, por tanto, un inmunomarcador multiuso y, en particular, un marcador inmunohistoquímico estándar para la hibridación in situ . [6] [7] En este caso, se conjuga con una única especie de trifosfato de nucleósido de ARN (normalmente uridina ), que luego se incorpora al ARN (una " ribosonda ") a medida que lo sintetiza la maquinaria celular.

Permite realizar:

Véase también

Referencias

  1. ^ "Digoxigenina". Hoja de datos de seguridad del material . ChemSrc.
  2. ^ Polya G (2003). Objetivos bioquímicos de compuestos bioactivos de plantas . Nueva York: CRC Press. ISBN 978-0-415-30829-8.
  3. ^ Tetin SY, Matayoshi ED (agosto de 2002). "Medición de la afinidad de los anticuerpos y realización de inmunoensayos a nivel de moléculas individuales". Analytical Biochemistry . 307 (1): 84–91. doi :10.1016/S0003-2697(02)00011-8. PMID  12137783.
  4. ^ Duan X (2012). "Cuantificación de las afinidades y cinética de las interacciones proteínicas utilizando biosensores de nanocables de silicio". Nature Nanotechnology . 7 (6): 401–407. Bibcode :2012NatNa...7..401D. doi :10.1038/nnano.2012.82. PMC 4180882 . PMID  22635097. 
  5. ^ Tinberg CE, Khare SD, Dou J, Doyle L, Nelson JW, Schena A, Jankowski W, Kalodimos CG, Johnsson K, Stoddard BL, Baker D (septiembre de 2013). "Diseño computacional de proteínas de unión a ligando con alta afinidad y selectividad". Nature . 501 (7466): 212–216. Bibcode :2013Natur.501..212T. doi :10.1038/nature12443. PMC 3898436 . PMID  24005320. 
  6. ^ Eisel D, Grünewald-Janho S, Krushen B, eds. (2002). Manual de aplicación DIG para hibridación in situ no radiactiva (3ª ed.). Penzberg: Roche Diagnóstico.
  7. ^ Hauptmann G, Gerster T (agosto de 1994). "Hibridación in situ de dos colores en embriones de vertebrados y de Drosophila". Tendencias en genética . 10 (8): 266. doi :10.1016/0168-9525(90)90008-T. PMID  7940754.
  8. ^ Hart SM, Basu C (abril de 2009). "Optimización de un sistema de inmunoensayo basado en digoxigenina para la detección de genes en Arabidopsis thaliana". Journal of Biomolecular Techniques . 20 (2): 96–100. PMC 2685603 . PMID  19503620. 
  9. ^ Décarie A, Drapeau G, Closset J, Couture R, Adam A (1994). "Desarrollo de péptidos marcados con digoxigenina: aplicación al inmunoensayo quimioluminiscente de bradicinina en tejidos inflamados". Péptidos . 15 (3): 511–8. doi :10.1016/0196-9781(94)90214-3. PMID  7937327. S2CID  19210640.
  10. ^ Mayilo S, Ehlers B, Wunderlich M, Klar TA, Josel HP, Heindl D, Nichtl A, Kürzinger K, Feldmann J (julio de 2009). "Inmunoensayo homogéneo competitivo de digoxigenina basado en la extinción de la fluorescencia mediante nanopartículas de oro". Analytica Chimica Acta . 646 (1–2): 119–22. Bibcode :2009AcAC..646..119M. doi :10.1016/j.aca.2009.05.023. PMID  19523564.
  11. ^ Goodarzi MT, Rafiq M, Turner G (mayo de 1995). "Un inmunoensayo multipocillo mejorado que utiliza lectinas marcadas con digoxigenina para estudiar la glicosilación de glicoproteínas purificadas". Biochemical Society Transactions . 23 (2): 168S. doi :10.1042/bst023168s. PMID  7672194.