Un radioinmunoensayo ( RIA ) es un inmunoensayo que utiliza moléculas radiomarcadas en una formación gradual de complejos inmunes . Un RIA es una técnica de ensayo in vitro muy sensible que se utiliza para medir concentraciones de sustancias, generalmente midiendo concentraciones de antígenos (por ejemplo, niveles de hormonas en sangre ) mediante el uso de anticuerpos .
Aunque la técnica RIA es extremadamente sensible y específica y requiere equipo especializado, sigue siendo uno de los métodos menos costosos para realizar tales mediciones. Requiere precauciones especiales y licencias, ya que se utilizan sustancias radiactivas. [ cita requerida ]
Por el contrario, un ensayo inmunorradiométrico (IRMA) es un inmunoensayo que utiliza moléculas radiomarcadas pero de forma inmediata en lugar de gradual.
Una prueba de radioalergoabsorción (RAST) es un ejemplo de radioinmunoensayo. Se utiliza para detectar el alérgeno causante de una alergia .
Clásicamente, para realizar un radioinmunoensayo, se hace radiactiva una cantidad conocida de un antígeno , frecuentemente marcándolo con isótopos radioactivos gamma de yodo , como 125-I , o tritio [1] unidos a tirosina . Luego, este antígeno radiomarcado se mezcla con una cantidad conocida de anticuerpo para ese antígeno y, como resultado, los dos se unen específicamente entre sí. Luego, se agrega una muestra de suero de un paciente que contiene una cantidad desconocida de ese mismo antígeno. Esto hace que el antígeno no marcado (o "frío") del suero compita con el antígeno radiomarcado ("caliente") por los sitios de unión del anticuerpo. A medida que aumenta la concentración de antígeno "frío", más de este se une al anticuerpo, desplazando la variante radiomarcada y reduciendo la proporción de antígeno radiomarcado unido al anticuerpo con respecto al antígeno radiomarcado libre. Luego, los antígenos unidos se separan y la radiactividad del antígeno libre (no unido) que queda en el sobrenadante se mide utilizando un contador gamma . Este valor se compara luego con una curva de calibración estandarizada para calcular la concentración del antígeno no marcado en la muestra de suero del paciente. [2] Los RIA pueden detectar unos pocos picogramos de analito en tubos experimentales si se utilizan anticuerpos de alta afinidad. [1]
Este método se puede utilizar para cualquier molécula biológica en principio y no está restringido a antígenos séricos, ni se requiere utilizar el método indirecto de medición del antígeno libre en lugar de medir directamente el antígeno capturado. Por ejemplo, si no es deseable o no es posible radiomarcar el antígeno o la molécula diana de interés, se puede realizar un RIA si hay dos anticuerpos diferentes que reconocen la diana y la diana es lo suficientemente grande (por ejemplo, una proteína) para presentar múltiples epítopos a los anticuerpos. Un anticuerpo se radiomarcaría como se indicó anteriormente, mientras que el otro permanecería sin modificar. El RIA comenzaría permitiendo que el anticuerpo no marcado "frío" interactúe y se una a la molécula diana en solución. Preferiblemente, este anticuerpo no marcado se inmoviliza de alguna manera, como acoplarlo a una perla de agarosa , recubrirlo con una superficie, etc. A continuación, se permite que el anticuerpo radiomarcado "caliente" interactúe con el primer complejo anticuerpo-molécula diana. Después de un lavado exhaustivo, se mide la cantidad directa de anticuerpo radiactivo unido y se cuantifica la cantidad de molécula diana comparándola con una cantidad de referencia analizada al mismo tiempo. Este método es similar en principio al método ELISA sándwich no radiactivo . [3]
Este método fue desarrollado por Solomon Berson y Rosalyn Sussman Yalow en el Hospital de Administración de Veteranos del Bronx , Nueva York. [4] [5] Este desarrollo revolucionario le valió a la Dra. Yalow el Premio Nobel de Medicina en 1977, la segunda mujer en ganarlo. [6] En su discurso de aceptación, la Dra. Yalow dijo: "El mundo no puede permitirse la pérdida de los talentos de la mitad de su gente si queremos resolver los muchos problemas que nos acosan". [7] Yalow compartió el Premio Nobel con Roger Guillemin y Andrew Schally , quienes obtuvieron el premio basándose en su investigación sobre "la producción de hormonas peptídicas del cerebro". [6]
Pasos de la técnica de radioinmunoensayo