Fibroblasto embrionario de ratón

MEF (fibroblastos embrionarios de ratón) en una placa de cultivo de tejidos.

Fotografía de células madre embrionarias humanas (las colonias de células en el centro). Las células fusiformes que rodean la colonia de células madre son células madre embrionarias.

Los fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) son un tipo de fibroblasto preparado a partir de embriones de ratón . Los MEF muestran una forma fusiforme cuando se cultivan in vitro , una característica típica de los fibroblastos. Los MEF son una línea celular limitada. Después de varias transmisiones, los MEF envejecerán y finalmente morirán. Sin embargo, los investigadores pueden utilizar varias estrategias, como la infección por virus o la transmisión repetida para inmortalizar las células MEF, lo que puede permitir que los MEF crezcan indefinidamente a pesar de algunos cambios en los caracteres. ^{[1] [2]}

Los MEF se utilizan ampliamente en investigaciones en ciencias de la vida, especialmente en biología de células madre .

Preparación y cultivo

Para preparar los MEF, se necesitan ratones hembras preñadas. Después de matar al ratón hembra, el investigador debe hacer una incisión en su estómago y luego separar el embrión de la placenta en una cabina de bioseguridad . Luego se deben extraer el hígado y la cabeza. Finalmente, digerir los restos con enzimas para obtener células aisladas individuales y cultivar las células en placas de cultivo de tejidos . Las células MEF se pueden cultivar in vitro en medio DMEM con 10% FBS . Para transmitir los MEF, los investigadores deben usar tripsina para digerir las células (haciéndolas desprender de la superficie) y transferir 1/5 de las células digeridas a una nueva placa. ^{[3] [1]}

Aplicación en biología

En 1962, George Todaro y Howard Green, dos investigadores de la Universidad de Nueva York , inmortalizaron las células MEF mediante transmisión repetida. Estas células se desarrollaron hasta convertirse en la línea celular NIH 3T3 , de uso común . ^[4]

Los MEF tratados con mitomicina o rayos gamma (este tratamiento hace que los MEF detengan la mitosis ) se utilizan ampliamente como alimentadores en cultivos de células madre embrionarias porque pueden imitar el microambiente del embrión. ^[5] En 2006, Shinya Yamanaka reprogramó los MEF en iPSC introduciendo 4 factores, lo que es notable en el desarrollo de la biología de las células madre. ^[6]

Véase también

• Fibroblast
• Célula madre embrionaria

Referencias

1. Jian-ming Xu (2005). "Preparación, cultivo e inmortalización de fibroblastos embrionarios de ratón". Protocolos actuales en biología molecular . 28 (1): 1–8.
2. Melissa M. St. Amand; John A. Hanover2; Joseph Shiloach1 (2016). "Una comparación de estrategias para inmortalizar fibroblastos embrionarios de ratón". J Biol Methods . 3 (2): e41. doi :10.14440/jbm.2016.110 (inactivo 2024-05-20). PMC 6706133 . {{cite journal}}: CS1 maint: DOI inactivo a partir de mayo de 2024 ( enlace ) CS1 maint: nombres numéricos: lista de autores ( enlace )
3. LANCTÔT. "PREPARACIÓN Y CONGELACIÓN DE FIBROBLASTOS EMBRIONARIOS DE RATÓN" (PDF) . Laboratorio LANCTÔT, MIT.^{[ enlace muerto permanente ]}
4. TODARO GJ, GREEN H (1963). "Estudios cuantitativos del crecimiento de células embrionarias de ratón en cultivo y su desarrollo en líneas establecidas". J. Cell Biol . 17 (2): 299–313. doi :10.1083/jcb.17.2.299. PMC 2106200. PMID  13985244 . 
5. Regad T, Sayers T, Rees R, eds. (2015). Principios de la biología de células madre y el cáncer: aplicaciones y terapias futuras . John Wiley & Sons. págs. 3-5. ISBN 978-1-118-67062-0.
6. Kazutoshi Takahashi, Shinya Yamanaka (25 de agosto de 2006). "Inducción de células madre pluripotentes a partir de cultivos de fibroblastos embrionarios y adultos de ratón mediante factores definidos". Cell . 126 (4): 663–676. doi :10.1016/j.cell.2006.07.024. hdl : 2433/159777 . PMID  16904174.