El caldo de lisogenia ( LB ) es un medio rico en nutrientes que se utiliza principalmente para el crecimiento de bacterias. Su creador, Giuseppe Bertani , pretendía que LB significara caldo de lisogenia , [1] pero LB también ha llegado a significar coloquialmente caldo Luria , caldo Lennox , caldo de vida o medio Luria -Bertani . [2] La fórmula del medio LB se publicó en 1951 en el primer artículo de Bertani sobre lisogenia . En este artículo, describió el experimento de ráfaga única modificado y el aislamiento de los fagos P1 , P2 y P3. Había desarrollado el medio LB para optimizar el crecimiento de Shigella y la formación de placas . [1] [3]
Las formulaciones de medio LB han sido un estándar industrial para el cultivo de Escherichia coli desde la década de 1950. [4] [5] Estos medios se han utilizado ampliamente en aplicaciones de microbiología molecular para la preparación de ADN plasmídico y proteínas recombinantes . Sigue siendo uno de los medios más comunes utilizados para mantener y cultivar cepas recombinantes de laboratorio de Escherichia coli . [5] [4] Sin embargo, para estudios fisiológicos, se desaconseja el uso de medio LB. [6]
Existen varias fórmulas comunes de LB. Si bien son diferentes, por lo general comparten una composición bastante similar de ingredientes utilizados para promover el crecimiento, incluidos los siguientes:
El cloruro de sodio aporta iones de sodio para el transporte y el equilibrio osmótico . La triptona se utiliza para proporcionar aminoácidos esenciales , como péptidos y peptonas, a las bacterias en crecimiento, mientras que el extracto de levadura se utiliza para proporcionar una gran cantidad de compuestos orgánicos útiles para el crecimiento bacteriano. Estos compuestos incluyen vitaminas y ciertos oligoelementos.
En su artículo original de 1951, Bertani utilizó 10 gramos de NaCl y 1 gramo de glucosa por cada 1 L de solución; Luria, en su "caldo L" de 1957, copió exactamente la receta original de Bertani. [7] Las recetas publicadas posteriormente por lo general han omitido la glucosa. [ cita requerida ]
Las formulaciones generalmente difieren en la cantidad de cloruro de sodio, lo que permite seleccionar las condiciones osmóticas adecuadas para la cepa bacteriana en particular y las condiciones de cultivo deseadas. Las formulaciones con bajo contenido de sal, Lennox y Luria, son ideales para cultivos que requieren antibióticos sensibles a la sal.
Antes de la esterilización en autoclave, algunos laboratorios ajustan el pH del LB a 7,5 u 8 con hidróxido de sodio. Sin embargo, el hidróxido de sodio no proporciona ninguna capacidad amortiguadora al medio, y esto da lugar a cambios rápidos del pH durante el cultivo de bacterias. Para solucionar esto, algunos laboratorios prefieren ajustar el pH con un tampón TRIS de 5-10 mmol/L , diluido a partir de una solución madre de TRIS de 1 mol/L al pH deseado. Sin embargo, no es absolutamente necesario ajustar el pH en la mayoría de las situaciones. Algunos laboratorios ajustan el pH a 7,0 simplemente como precaución. [8]