La extracción con fenol es una técnica de laboratorio que purifica muestras de ácidos nucleicos mediante una solución de fenol . El fenol es un reactivo común en la extracción porque sus propiedades permiten una extracción eficaz de ácidos nucleicos, en particular porque desnaturaliza fuertemente las proteínas, es un conservante de ácidos nucleicos y es inmiscible en agua.
También puede referirse al proceso de extracción y aislamiento de fenoles a partir de materias primas como el alquitrán de hulla . Estos fenoles purificados se utilizan en muchos compuestos industriales y médicos y se emplean como precursores en algunas reacciones de síntesis .
La extracción de fenol es una técnica ampliamente utilizada para purificar muestras de ácidos nucleicos de lisados celulares . [1] Para obtener ácidos nucleicos , la célula debe ser lisada y los ácidos nucleicos separados de otros componentes celulares.
El fenol es una sustancia polar con una densidad mayor que la del agua (1,07 g/cm 3 [2] en comparación con los 1,00 g/cm 3 del agua ). Cuando se suspende en una solución de agua y fenol, las proteínas desnaturalizadas y los componentes celulares no deseados se disuelven en el fenol, mientras que los ácidos nucleicos polares se disuelven en la fase acuosa. [3] Luego, la solución se puede centrifugar para separar el fenol y el agua en fases orgánica y acuosa distintas . Los ácidos nucleicos purificados se pueden precipitar de la fase acuosa de la solución.
El fenol se utiliza a menudo en combinación con cloroformo . [4] La adición de un volumen igual de cloroformo y fenol garantiza una separación clara entre las fases acuosa y orgánica. El cloroformo y el fenol son miscibles y crean una solución más densa que el fenol solo, lo que ayuda a la separación de las capas orgánica y acuosa. Esta adición de cloroformo es útil cuando se elimina la fase acuosa para obtener una muestra de ácido nucleico purificado.
El pH de la solución debe ajustarse específicamente para cada tipo de extracción. Para la extracción de ADN , el pH se ajusta a 7,0–8,0. Para la extracción específica de ARN , el pH se ajusta a 4,5. A pH 4,5, los iones de hidrógeno neutralizan las cargas negativas de los grupos fosfato , lo que hace que el ADN se disuelva en la fase orgánica mientras que permite aislar el ARN por separado en la fase acuosa.